Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Сравнение стратегий очистки трех изоферментов пероксидазы хрена, рекомбинантно полученных в Pichia pastoris

Раджаманикам В., Винклер М., Флотц П., Мейер Л., Хервиг С. и Спадиут О.

Пероксидаза хрена (HRP), универсальный гемсодержащий гликопротеин , часто используемый в медицинской диагностике, в первую очередь выделяется из растений. Этот процесс включает фильтрацию, осаждение солью и несколько этапов хроматографии, что является дорогостоящим, обеспечивает низкие выходы и дает смеси изоферментов. Хотя отдельные изоферменты могут быть получены рекомбинантным путем в Pichia pastoris, они подвергаются гипергликозилированию в дрожжах, что делает последующий процесс громоздким и, таким образом, неконкурентоспособным. В этом исследовании мы проанализировали очистку трех изоферментов HRP, различающихся по количеству сайтов N-гликозилирования, рекомбинантно полученных в P. pastoris. Мы хотели 1) определить потенциальные корреляции между способом производства белка и качеством получаемого продукта и последующим процессом, 2) исследовать корреляции между количеством сайтов N-гликозилирования HRP и способом очистки и 3) найти оптимальную стратегию очистки для рекомбинантно полученных изоферментов HRP. Таким образом, мы применили различные стратегии культивирования и протестировали процессы ниже по потоку, используя как смолы на основе частиц, так и монолитные носители. Мы показали, что режим культивирования влияет на чистоту продукта, но не на последующий процесс ниже по потоку. Очистка каждого из трех изоферментов HRP с использованием монолитных носителей была успешной и независимой от количества участков N-гликозилирования, тогда как очистка смолами на основе частиц сильно зависела от гликозилирования. Подводя итог, мы продемонстрировали новую возможность использования монолитов, работающих в проточном режиме, для очистки сравнительно небольших биомолекул .