Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка метода сверхвысокой производительности жидкостной хроматографии на диодной матрице для количественного определения вориконазола в плазме человека

Юсра Эльмазахи*, Ахмед Фараг, Лобна Шалаби, Мохамед Надь,

Разработан и проверен быстрый и селективный метод обращенно-фазовой (RP) жидкостной хроматографии на диодной матрице (DAD) для определения вориконазола в плазме человека. Благодаря высокой пропускной способности и чувствительности сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC) время работы составило всего 7,5 минут, и буферы не использовались. Добавляли 200 мкл сыворотки и 200 мкл внутреннего стандарта флуконазола. После простого осаждения белка с 400 мкл метанола 10 мкл прозрачного супернатанта разделяли на колонке Agilent Zorbax Eclipse Plus® C18 (50*2,1 мм, 1,8 мкм). Температура колонки поддерживалась на уровне 40 °C. Скорость потока составляла 0,4 мл/мин с использованием градиентного элюирования метанолом и водой. Время удерживания флуконазола и вориконазола составило 4,2 и 6,2 мин соответственно. Детектирование проводилось с использованием диодного матричного детектора, установленного на длину волны 261 нм. Метод был оптимизирован и проверен в соответствии с Руководством FDA для промышленности, Валидация биоаналитического метода. Пригодность системы с точки зрения теоретических тарелок, разрешения, размытия и точности инъекции с точки зрения времени удерживания и площади была выполнена для обеспечения пригодности и эффективности хроматографической системы в соответствии с руководящими принципами ICH. Разработанный метод обеспечил выдающиеся результаты по восстановлению, точности, прецизионности, селективности, стабильности и воспроизводимости. Калибровочная кривая была линейной в диапазоне 0,2-12 мкг/мл с коэффициентом корреляции 0,9997c, что адекватно покрывало терапевтический диапазон для соответствующего мониторинга лекарственных средств. Предел обнаружения и количественного определения составил 0,2 мкг/мл и 0,5 мкг/мл соответственно. Точность и точность CV в течение дня составили 91,2%-120% и 0,8%-6,8% соответственно, а точность и точность в течение дня составили 92,6%-115% и 2,5%-7,5% соответственно. Абсолютное восстановление составило 100% ± 15% для вориконазола.