Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка специфического для COL3A1 ПЦР-анализа в реальном времени для клинических и спортивных целей

Мартинес Б., Хименес А., Диас Т., Сегура Дж. и Ферро П.*

PIIINP, ген которого — COL3A1, — это белок, используемый в качестве биомаркера, который изменяется при различных патологиях, таких как жировая дистрофия печени неалкогольного происхождения, а также используется для выявления злоупотребления человеческим рекомбинантным гормоном роста (rhGH) элитными спортсменами для улучшения своих результатов. Поэтому изучение уровней этого белка или его гена может быть полезным для диагностики этих патологий, в дополнение к другим применениям. Целью данной работы была разработка нового метода обнаружения гена COL3A1, основанного на количественной оценке мРНК в реальном времени. 10 здоровым мужчинам-добровольцам в течение 3 последовательных дней вводили внутривенно 0,026 мг-1кг-1день-1человек-1 rhGH, а образцы сыворотки и крови собирали в течение 7 дней в разное время. Извлечение мРНК проводилось после очистки лимфоцитов в соответствии со стандартными протоколами, а образцы количественно определялись с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием зондов TaqMan, разработанных специально для этого гена. Результаты показали увеличение экспрессии COL3A1, которое сохранялось в течение 7 дней отбора проб после последнего введения, наблюдая более чувствительные и надежные результаты по сравнению с количественным определением белка PIIINP в сыворотке тех же лиц. После настройки испытания была проведена частичная валидация, в которой были изучены такие параметры, как линейность, меж- и внутрипробная вариация, влияние пола и возраста, стабильность образцов крови при хранении при 4°C и количество образца крови.