Андрология-открытый доступ
Открытый доступ

Абстрактный

Уровень конденсации хроматина сперматозоидов: в зависимости от фиксаторов

Тулай Ирез, Тугче Дурмус

Хроматин сперматозоидов претерпевает структурные изменения во время сперматогенеза, вызывая высокую конденсацию. Этот ядерный обмен считается предиктором способности сперматозоидов к оплодотворению и исхода беременности. Различные исследования показали связь между мужским бесплодием и дефицитом протамина в сперматозоидах, и было высказано предположение, что это может быть важным фактором, определяющим целостность ДНК сперматозоидов. Окрашивание кислым анилиновым синим часто используется с фиксацией глутаральдегидом и окрашивает гистоны из-за лизина в ядре сперматозоида. Исследования показали, что уровень гистонов в ядрах сперматозоидов тесно связан с повреждением ДНК и бесплодием. Конденсация хроматина сперматозоидов выражается наличием протамина в ядре сперматозоида, то есть отсутствием гистона. В этом исследовании мы изучили, как метод окрашивания анилиновым синим может правильно определять конденсацию хроматина сперматозоидов при применении различных методов фиксации. В этом исследовании использовались четыре различных фиксатора. В качестве фиксаторов использовались глутаральдегид (2,5%), метанол/уксусная кислота Carney's, (3/1), этиловый спирт (98%) и формальдегид (10%), краситель анилиновый синий, применяемый в обычных концентрациях в цитологических препаратах. Из этих фиксаторов глутаральдегид широко используется для отображения гистонов спермы. Для расчета различий в скоростях конденсации хроматина (анилиновый синий отрицательный) между различными фиксаторами были выполнены t-критерий Стьюдента и дисперсионный анализ повторных измерений. Когда значения конденсации хроматина, полученные с помощью фиксации глутаральдегидом, сравнивались с полученными с помощью фиксации метанолом и спиртом, наблюдались статистически значимые различия (p=0,014, p=0,0001). Наблюдалась положительная корреляция между глутаральдегидом и формальдегидом (p=0,51) и отрицательная корреляция между глутаральдегидом и формальдегидом, метанолом/уксусной кислотой и фиксацией спиртом (p=0,005, p=0,0005 Ve p=0,0005, p=0,007). Была определена положительная корреляция конденсации хроматина с концентрацией и подвижностью сперматозоидов (p=0,012, p<0,001). Согласно результатам, полученным в этом исследовании, фиксации 2,5% глутаральдегида и 10% формальдегида были подходящими для определения конденсации хроматина с анилиновым синим, но метанол/уксусная кислота и этиловый спирт не подходят для этой цели. Было отмечено, что фиксаторы на основе спирта, которые мы тестировали в нашем исследовании, не показывали специально лизин спермы и вызывали окрашивание всего ядра анилиновым синим.