Иммунные исследования
Открытый доступ
ISSN: 1745-7580
ISSN: 1745-7580
Саймон П. Грэм, Йошиказу Хонда, Роджер Пелле, Дункан М. Мванги, Э. Джейн Глю, Этьен П. де Вильерс, Трушар Шах, Ричард Бишоп, Пьер ван дер Брюгген, Вишванат Нене и Эванс Л. Н. Тарача
Предыстория: Ранее было показано, что иммунитет против бычьего простейшего паразита Theileria parva опосредован лизисом инфицированных паразитом клеток CD8+ цитотоксическими Т-лимфоцитами, ограниченными MHC класса I. Предполагается, что идентификация целевых шизонтных антигенов CTL поможет в разработке субъединичной вакцины. Мы использовали доступность данных о полной последовательности генома и биоинформатических инструментов для идентификации генов, кодирующих секретируемые или закрепленные на мембране белки, которые могут быть обработаны и представлены молекулами MHC класса I инфицированных клеток CTL. Результаты: Из 986 предсказанных открытых рамок считывания (ORF), кодируемых хромосомой 1 генома T. parva, 55 были отобраны на основе наличия сигнального пептида и/или домена трансмембранной спирали. Тридцать шесть выбранных ORF были успешно клонированы в эукариотический вектор экспрессии, временно трансфицированы в бессмертные фибробласты кожи крупного рогатого скота и подвергнуты скринингу in vitro с использованием специфических для T. parva CTL. Распознавание генных продуктов CTL оценивалось с помощью анализа IFN-γ ELISpot. ORF из 525 пар оснований, кодирующая белок из 174 аминокислот, обозначенный как Tp2, была идентифицирована специфическими для T. parva CTL от 4 животных. Эти CTL распознавали и лизировали трансфицированные Tp2 фибробласты кожи и распознавали 4 различных эпитопа. Важно отметить, что специфические для Tp2 реакции CD8+ T-клеток наблюдались во время защитного иммунного ответа против заражения спорозоитами. Заключение: Идентификация антигена, содержащего несколько эпитопов CTL, и его очевидное иммунодоминирование во время защитного антипаразитарного ответа делает Tp2 привлекательным кандидатом для оценки его вакцинного потенциала.