Журнал гликомики и липидомики
Открытый доступ

Абстрактный

Надежная клеточная платформа для изучения эпителиально-мезенхимального перехода, созданная путем редактирования генов

Михал Килбус

Эпителиально -мезенхимальный переход (ЭМП) и его обратный процесс, мезенхимально-эпителиальный переход (МЭП), являются физиологическими процессами, которые также играют важную роль в заболевании. Все больше доказательств коррелируют ЭМП с неблагоприятным исходом множественных неоплазий, а также метастазами и лекарственной устойчивостью. Таким образом, молекулярные механизмы, которые регулируют ЭМП, являются важной областью исследований рака и таргетирования лекарств. Для изучения ЭМП обычно используются различные экзогенные системы репортеров, которые могут сигнализировать о фенотипических изменениях. Тем не менее, использование экзогенных репортеров, которые не способны описывать молекулярные события, включая вмешательство альтернативных промоторов, регуляторных элементов или эпигенетических механизмов, которые модулируют активацию промотора, делает некоторые данные ненадежными. Пытаясь преодолеть эти ограничения, мы разработали и проверили линию репортерных клеток, модифицировав эндогенный ген VIMENTIN (ген, связанный с ЭМП) с помощью технологии редактирования генов CRISPR/Cas9. В частности, мы успешно вставили последовательность ДНК, содержащую саморасщепляющийся пептид, за которым следует флуоресцентный белок в рамке с VIMENTIN, в геном клеток рака легких H2170. Наши данные однозначно иллюстрируют, что репортерные клетки Vimentin являются надежной моделью для изучения EMT и MET. Репортерные клетки Vimentin позволяют проводить пространственно-временное наблюдение за клеточной пластичностью в отношении их мезенхимального/эпителиального in vitro и в будущем in vivo. Это превосходная модель для изучения молекулярных механизмов EMT/MET, а также надежная платформа для скрининга новых противораковых препаратов.