Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Улучшенный метод ВЭЖХ для количественного определения метанефрина с кулонометрическим детектированием

Педро А.К., Соареш РФ, Оппольцер Д., Сантос Ф.М., Роша Л.А., Гонсалвес А.М., Бонифачо М.Ю., Кейруш Х.А., Галларду Э. и Пассаринья Л.А.

Разработан и проверен быстрый и простой аналитический метод, основанный на использовании RP-HPLC с кулонометрическим детектированием, для количественного определения метанефрина, O-метилированного продукта в ферментативных анализах катехол-O-метилтрансферазы. Изократическое разделение было достигнуто на обратной колонке с подвижной фазой, состоящей из 0,1 M дигидрофосфата натрия, 0,024 M моногидрата лимонной кислоты, 0,5 mM октилсульфата натрия и 9% ацетонитрила (% об./об.). Было обнаружено, что метод является линейным между 0,25 и 15 нмоль/мл с коэффициентом определения 0,9997 для метанефрина. Внутри- и междневная точность и достоверность соответствовали критериям, принятым при валидации биоаналитических методов, а LOD и LLOQ составили 0,25 нмоль/мл. Основное внимание в разработанном методе уделяется достижению более низкого LLOQ, что может иметь важные последствия в лабораторных исследованиях для определения активности COMT, в частности для варианта метионина 108/158, полученного либо из нативных, либо из рекомбинантных экстрактов. Другим важным преимуществом настоящего метода является более короткое время работы на автоматизированных хроматографических системах, что позволяет анализировать несколько образцов за короткое время. Кроме того, метанефрин был стабилен в образцах в течение не менее 24 ч при комнатной температуре, в течение не менее 24 ч в инжекторе системы ВЭЖХ и в течение не менее трех циклов замораживания/оттаивания. Разработанный метод продемонстрировал более высокую чувствительность, точность, правильность, стабильность и линейность по сравнению с ранее описанными методами. Наконец, катехол-O-метилтрансфераза