Транскриптомика: открытый доступ
Открытый доступ

Абстрактный

Артикуляция Escherichia coli и очистка человеческого интерферона альфа, смешанного с SAK

Радж Гайквад

Описана стратегия улучшенной рефолдинга и фильтрации человеческого интерферона - α (rhIFN α2b) E. coli, выведенного из инкорпорационных тел в качестве комбинированного белка стафилокиназы (SAK). Такой комбинированный белок не требовал добавления необычных кодонов для артикуляции и оказался устойчивым при 37oC. Идеальные состояния рефолдинга включали использование мягкого денатурирующего оператора без необходимости использования других специалистов для предотвращения конгломерации. Комбинированный белок SAKrhIFN α2b был эффективно отфильтрован с использованием двух стадий очистки и был разделен с использованием энтерокиназы на две части, а именно SAK и IFN. Оба белка рассматривались как органически динамические, выглядящие надлежащим образом при сворачивании обоих комбинированных соучастников. Разделенный IFN продемонстрировал сопоставимое время поддержания на RP-HPLC, как и бактериально определенный немеченый отфильтрованный IFN, а также сопоставимую субатомную нагрузку на Agilent 2100 Bioanalyzer, показывающую правильное приготовление IFN после расщепления энтерокиназой. Уровни сочленения SAK-IFN были обнаружены как в два раза выше, чем у немеченого IFN в сравнительных исследовательских условиях. Интерфероны (IFN) являются характерными белками-маркерами клеток, вырабатываемыми клетками безопасного расположения большинства позвоночных в свете трудностей, например, инфекций, паразитов и опухолевых клеток. Они занимают место в огромном классе гликопротеинов, которые доставляются широким спектром клеток из-за близости двухцепочечной РНК, ключевого маркера вирусного заражения. После того, как была осознана клиническая эффективность IFN, FDA одобрило препараты, в частности rhIFNα2a (Roferon An) и IFNα2b (Intron A) для лечения опасных опухолей и вирусных заболеваний. Лечение интерфероном используется (в сочетании с химиотерапией и облучением) для лечения некоторых заболеваний, таких как саркома Капоши, связанная с лейкозом, и постоянный гепатит B и C (Remington, 1995).