Микобактериальные заболевания
Открытый доступ
ISSN: 2161-1068
ISSN: 2161-1068
Изабела Гама Сарделла, Ана Карла де Пауло Мулинари, Лейла де Соуза Фонсека и Мария Хелена Ферес Саад
Специфические антигены Mycobacterium tuberculosis (Ag) будут иметь важное значение при разработке иммунодиагностического теста на туберкулез (ТБ), однако гетерогенное распознавание эпитопов Ag человеком может привести к изменению специфичности теста. В этой работе мы описали конструкцию двух белков слияния на основе двух пептидов из MPT-64, разрушающих MT-10 Ag, F1-MT10.3 (1M-40S):CE15 (173G-187A):MT10.3 (41S-96) и F2- MT10.3 (1M-40S):MPT64 (91L-205A):MT10.3 (41S-96), и их потенциальную иммунореактивность в сыворотках туберкулеза. Эти гены слияния были клонированы в векторе экспрессии, вставлены в E. coli, а их белки были экспрессированы и очищены. Используя метод ELISA, очищенные слитые белки и отдельные полные антигены были оценены на IgA, IgM и IgG в сыворотках от лиц с диагнозом туберкулез легких (ТБ) и контрольных лиц с другими легочными заболеваниями. Конструкция F1 генерировала новый пептид, а F2 генерировал два модифицированных пептида по сравнению с отдельными полными белками. При тестировании сывороток человека с туберкулезом конструкции распознавались всеми типами антител, но наилучшие результаты были получены для ELISA-IgA, который преимущественно распознавал F2 (66,7%) и F1 (58,3%), за которыми следовали полные отдельные антигены MT10.3 (41,7%) и MPT64 (16,7%), сохраняя самую высокую специфичность (95,5%), до сих пор оставаясь незамеченным. Реактивность IgG-F1 и IgM-F2 показала более высокий UAC, чем полные MT10.2 и MPT64. Полученные данные продемонстрировали жизнеспособность конструкций и полезность модификации молекул для получения потенциального улучшения иммунной реактивности, что заслуживает дальнейшей иммунологической характеристики.