Журнал клинической и экспериментальной офтальмологии
Открытый доступ

Абстрактный

Контролируемая экспрессия гена урокиназы в клетках трабекулярной сети

Мей Цуда, Сихо Канеко, Акира Андо, Тэцуя Нисимура, Эмико Окуда-Ашитака, Сейджи Ито, Макото Таомото, Мийо Мацумура и Кандзи Такахаши

Цель: Глаукома — это тип прогрессирующей оптической нейропатии, которая в конечном итоге приводит к слепоте, связанной с повышенным внутриглазным давлением (ВГД). Накопление внеклеточного матрикса в трабекулярной сети (ТМ) и юкстаканаликулярных соединительных тканях, которые образуют путь оттока водянистой влаги, может быть основной причиной повышенного ВГД, таким образом, фибринолитическая система может быть связана с регуляцией ВГД. Мы изучили возможность контролируемого переноса гена активатора плазминогена урокиназы (uPA) в клетки ТМ.
Методы: клетки ТМ были свежевыделены из свиных глаз и клеток ТМ человека, полученных во время процедур трабекулэктомии, и культивированы. Общая РНК была извлечена из клеток ТМ человека и обратно транскрибирована в кДНК. Затем был проведен метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) для обнаружения экспрессии гена uPA. кДНК человеческого uPA была субклонирована в вектор экспрессии (вектор pEYFP-N1) и вектор контролируемой экспрессии (вектор TRE-Tight), затем каждый вектор был независимо трансфицирован в культивируемые клетки TM свиньи. Доксициклин был добавлен в культуральную среду для активации векторов pTet-ON и TRE-Tight. Наконец, экспрессия uPA была исследована с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).
Результаты: Результаты ИФА показали экспрессию uPA (3,5 нг/мл) в среде из культивируемых клеток TM свиньи, которые были трансфицированы геном uPA человека с использованием вектора pEYFP-N1. Доксициклин индуцировал человеческий uPA в векторах pTet-On и TRE-Tight с котрансфицированным геном uPA человека в клетках TM дозозависимым образом.
Выводы: Контролируемый перенос гена uPA, который может разрушать внеклеточный матрикс в юкста-каналикулярной соединительной ткани, в клетки TM был достигнут с использованием системы Tet-On. Настоящий метод может быть полезен в качестве новой терапии глаукомы.