Журнал клеточной науки и терапии
Открытый доступ
ISSN: 2157-7013
ISSN: 2157-7013
Свананд Коли, Арун П. Сикарвар, Мурали Р. Бабу и Редди КВР
В постнатальном яичке недифференцированные сперматогониальные стволовые клетки типа А (SSC) дифференцируются в сперматогониальные клетки типа В (SGC) в присутствии c-Kit, который экспрессируется специфическим для клеток/стадий образом во время сперматогенеза у млекопитающих. c-Kit подвергается строгому транскрипционному контролю, поскольку он необходим не только для половых клеток, но и для развития гемопоэтических стволовых клеток и меланоцитов. Хотя экспрессия c-Kit является динамически регулируемым процессом, молекулярная основа его транскрипционной регуляции во время сперматогенеза остается в основном неопределенной. Целью исследования является определение того, будет ли введение трансгенной конструкции, экспрессирующей c-Kit, в c-Kit-отрицательные SSC, выделенные из мутантных мышей Wv/Wv, дифференцироваться и колонизироваться в яичках мышей-реципиентов. Для этой цели была разработана трансгенная конструкция pG1-Kit-ORF-GFP размером 7,4 кб, которая содержит кассету экспрессии c-Kit-ORFGFP размером 4,4 кб, и ее экспрессия in vitro была подтверждена с помощью иммунофлуоресценции и проточной цитометрии. Для сравнения результатов были также разработаны три конструкции control-GFP размером 1,1 кб (без промотора c-Kit и ORF), 4,1 кб (без промотора c-Kit) и 1,4 кб (без c-kit-ORF), которые были введены в SSC с помощью электропорации (EP). Эти SSC были введены в яички бесплодных мышей-реципиентов, получавших лечение бусульфаном, через сеть с использованием подхода трансплантации зародышевых клеток (GCT). Было отмечено, что SSC, несущие трансгенную вставку c-Kit-ORF-GFP, были способны колонизироваться и дифференцироваться в другие линии зародышевых клеток в семенных канальцах мышей-реципиентов по сравнению с контрольными группами. В заключение, мыши-мутанты яичек Wv/Wv имеют популяцию SSC, в которой функция сигнализации c-Kit нарушена впервые, мы сообщаем, что функция SSC у реципиентных бесплодных мышей может быть возобновлена с введением трансгенной вставки c-Kit-ORF-GFP. Таким образом, настоящие результаты могут оказать значительное влияние на понимание репродуктивной физиологии и потенциала для новых будущих методов лечения пациентов с тестикулярной недостаточностью.