Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка и валидация метода количественного определения свободного кортизола в моче за 24 часа методом масс-детекции

Момал Алекс*, Дессе Квентин, Годернио Николя, Колсул Мари-Лиза, Клоссе Мелани

Введение: Измерение экскреции кортикостероидов и их метаболитов с мочой используется для оценки функции надпочечников при синдроме Кушинга или раке надпочечников. Количественное определение свободного кортизола в моче (UFC) рекомендуется для диагностики синдрома Кушинга.

Цель: Разработать простую, воспроизводимую и специфичную методику количественного определения UFC с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC).

Методы: Мы разработали метод, основанный на анализе сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC), сопряженном с одним квадрупольным масс-детектором (QDa). Образцы были извлечены с помощью поддерживаемой жидкостной экстракции (SLE). Мочу предварительно обрабатывали 1% муравьиной кислотой и внутренним стандартом. Кортизол элюировали дихлорметаном. Растворитель выпаривали, а образцы восстанавливали водой. Соединения разделяли на колонке HSS T3 с градиентным элюированием (вода, 0,1% муравьиной кислоты и ацетонитрил). Объем инъекции составлял 1 мкл, а скорость потока 0,6 мл/мин. Мы исследовали метод с точки зрения линейности, точности, извлечения, правильности и пределов обнаружения и количественного определения.

Результаты: Линейный диапазон для этого метода составил от 5 мкг/л до 1000 мкг/л с коэффициентом определения 0,99. Точность была оценена с помощью относительного стандартного отклонения (RSD) для внутрианализа и между анализами и была ниже 9% для обоих из них. Метод показал адекватное восстановление кортизола (>91%). Предел обнаружения составил 0,28 мкг/л, а предел количественного определения — 0,75 мкг/л.

Заключение: Метод обнаружения UFC UHPLC-QDa с шагом SLE показывает адекватные характеристики. Он прост, воспроизводим и подходит для рутинного лабораторного использования.