Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка и валидация метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) для определения тенофовира в малых объемах плазмы человека

Мулубва М., Ридерс М., Дю Плесси Л., Гроблер А. и Вилджоен М.

Определение концентраций тенофовира в плазме (TFV) в небольших объемах плазмы и за короткий период времени является наиболее желательным в клинических условиях. Метод ВЭЖХ -МС/МС был разработан и валидирован для определения TFV. Объемы образцов плазмы 10 мкл были извлечены путем осаждения белка. Циметидин, используемый в качестве внутреннего стандарта (ISTD), и TFV были разделены на обращенно-фазовой колонке C18 (Phenomenex Kinetex TM 30 мм × 2,1 мм, 2,6 мкм) с предварительной колонкой. Градиентная подвижная фаза состояла из 10 ммоль/л ацетата аммония в воде и ацетонитрила/метанола (50:50, об./об.). Время удерживания TFV и ISTD составило 0,27 и 0,90 минут соответственно, при времени анализа 2 минуты. Переход родительского соединения в ион продукта TFV (m/z 288,072→176,038) и ISTD (m/z 253,13→158,987) контролировали в режиме положительной ионизации. Калибровочные кривые были линейными (среднее значение r2, 0,9958) в диапазоне концентраций TFV от 12,5 до 600 нг/мл. Среднее восстановление составило 96,9%. Точность, меж- и внутрианализные данные трех контролей качества и нижний предел количественного определения (12,5 нг/мл) находились в приемлемом диапазоне относительной стандартной ошибки <15%. TFV был стабилен в изученных условиях, и не наблюдалось ни эффекта матрицы, ни значительного переноса. Разработан, проверен и внедрен отдельный, надежный и обоснованный метод определения TFV в небольшом объеме (10 мкл) человеческой плазмы для определения уровней TFV в плазме у 30 ВИЧ-инфицированных женщин, получающих антиретровирусную терапию.