Журнал сельскохозяйственных наук и пищевых исследований
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка Rapidot иммуноферментных анализов для обнаружения вируса банановой кустистости верхушки

Намрата Н.Д., Нараян Б.М., Чугал А. и Чидананд А.Р.

BBTV использовался в качестве антигена для получения вариабельного фрагмента одной цепи (scFv) антитела с использованием технологии фагового дисплея. Были отобраны два клона, показывающие наивысшее считывание в моноклональном ИФА, а именно pBSNMAB5 и pBSNMAB40. Фрагменты антител одной цепи pBSNMAB5 и pBSNMAB40 были субклонированы в экспрессионный вектор pQUANTa body, что позволило транскрипционно слиться с фрагментом моноклонального антитела scFv и геном, кодирующим фермент щелочной фосфатазы (PhoA). Клоны были секвенированы с помощью прямого праймера LMB3 и обратного праймера pHEN и охарактеризованы. Гены scFv обоих клонов имели длину 795 п.н., и было обнаружено, что они имеют схожую гомологичную последовательность. Результаты анализа BLASTn и BLASTx показали 85 процентов гомологии с синтетической конструкцией гена одноцепочечного антитела Fv против TNF альфа, частичной cds и далее анализ BLASTx показал 86 процентов гомологии с вариабельной областью тяжелой цепи циркулирующего антитела B-клеток (Homo sapiens). При экспрессии клона он продуцировал белок слияния ALP вместе с моноклональными антителами pBSNMAB5 и pBSNMAB40. Конъюгат scFv-ALP был получен против белка BBTV. С использованием этого конъюгата антител был разработан набор для обнаружения. Этот набор Rapidot Immunodiagnostic обнаруживает BBTV в концентрации всего 0,9 г/мл как в мембране NC, так и в мембранной кассете, и он также был перекрестно проверен с другими белками для оценки специфичности моноклонов, полученных против BBTV.