Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Разработка метода метаболомики цвиттер-ионной гидрофильной жидкостной хроматографии (ZIC-HILIC-MS) для точного анализа мочи человека

Друпад К. Триведи, Хью Джонс, Аджит Шах и Рэй К. Айлс

Моча является продуктом метаболизма организма, и большинство продуктов метаболизма, выходящих через почечную систему, становятся полярными, чтобы быть водорастворимыми. Разделение метаболитов мочи для метаболомных исследований требует разработки методов разделения ВЭЖХ, которые соответствуют этой особенности биологической химии. ZIC–HILIC является идеальным кандидатом для прямого разделения таких метаболитов, где обратная фаза неспособна дать адекватное разделение. Метаболомные данные должны быть обработаны многомерным анализом Shotgun для просеивания тысяч аналитов и их переменных, таких как интенсивность ионов. При разработке разделения ZIC-HILIC с масс-спектрометрическим (IT-ToF) обнаружением методологическая изменчивость должна быть минимизирована, чтобы любой анализ данных Shotgun не выявлял потенциальные аналиты биомаркеров, которые являются артефактами или на которые неблагоприятно влияет метод разделения и обнаружения. Здесь мы сообщаем о разработке метода масс-спектрометрии ZIC-HILIC, который подходит для анализа данных SIMCA P+ мочи. Такие переменные, как разрешение, воспроизводимость прогона и температура хранения образца, оценивались совместно с анализом данных SIMCA P+ и предварительной обработкой контроля качества. Разработанный метод объединяет прогоны контроля качества, которые предварительно обрабатывают и исключают аналиты, которые недостаточно надежны для дальнейших исследований кандидатов на биомаркеры. Это означало, что лабильные аналиты, которые не могли быть воспроизведены в 70% прогонов контроля качества (которые являются пулами всех образцов, проведенных в тот день), были исключены. Однако образцы мочи, хранящиеся при температуре 4 °C в течение более 9 месяцев, будут содержать метаболиты, которые будут изменяться и производить артефакты маркеров малых молекул по сравнению с образцами, хранящимися при температуре -20 °C. В заключение следует отметить, что разработанный метод является надежным методом масс-спектрометрического анализа методом дробовика ZIC-HILIC, подходящим для обнаружения мочевого метаболома надежных биомаркеров.