Журнал клинической и экспериментальной офтальмологии
Открытый доступ

Абстрактный

Дифференциация стволовых клеток, полученных из жировой ткани человека, по линии кератоцитов in vitro

Шицзя Чжан, Ладан Эспандар, Кэтлин МП Имхоф и Брюс А. Баннелл

Цель: Оценить дифференциацию стволовых клеток, полученных из жировой ткани человека (hASC), в линию кератоцитов путем совместного культивирования с первичными кератоцитами in vitro .
Материалы и методы: Была разработана система совместного культивирования с использованием вставок transwell для выращивания hASC на дне и кератоцитов наверху в среде для дифференцировки кератоцитов (KDM). В качестве контроля использовались hASC, культивированные в полной культуральной среде (CCM) и KDM. Через 16 дней hASC исследовали на предмет морфологических изменений и пролиферации путем подсчета клеток. Для обнаружения экспрессии семейства альдегиддегидрогеназы 3, члена A1 (ALDH3A1) и кератокана использовали количественную ОТ-ПЦР и проточную цитометрию.
Результаты: hASC стали более дендритными и удлиненными в системе совместного культивирования по сравнению с CCM и KDM. Время удвоения клеток увеличивалось по мере прогрессирования дифференциации. qRT-PCR показала определенную тенденцию к повышению экспрессии как ALDH3A1, так и кератокана в системе совместного культивирования, несмотря на статистически незначимые значения p. Проточная цитометрия показала значительное повышение уровня белка ALDH3A1 и кератокана в системе совместного культивирования по сравнению с группой CCM (p < 0,001) и даже по сравнению с группой KDM (p < 0,001 для ALDH3A1 и p < 0,01 для кератокана).
Заключение: Метод совместного культивирования является многообещающим подходом для индукции дифференциации популяций стволовых клеток перед применением in vivo. Это исследование раскрывает важный потенциал для биоинженерии ткани роговицы с использованием аутологичных мультипотенциальных стволовых клеток.