Репродуктивная система и сексуальные расстройства: текущие исследования
Открытый доступ
ISSN: 2161-038X
ISSN: 2161-038X
Ewa L Gregoraszczuk
Абстрактный
Типичным обнаружением в клетках роста рака является сверхэкспрессия гистондеацетилаз (HDAC), что приводит к изменению артикуляции и движения различных белков, связанных с канцерогенезом. Принимая во внимание, что лептин может регулировать степень HDAC, мы предположили, что враги рецепторов лептина могут изменять артикуляцию HDAC.
Материалы и методы : Артикуляция HDAC в клетках, презентированных лептину и противникам рецепторов лептина (SHLA и Lan2), оценивалась в клетках эпителия яичников и фолликуломы (COV434, KGN).
Результаты : Более высокая артикуляция HDAC была обнаружена в эпителиальных клетках по сравнению с клетками фолликуломы. Лептин расширил HDAC класса I и II только в клетках OVCAR-3, а SHLA был более сильным, чем Lan-2. В клетках фолликуломы лептин расширил только артикуляцию HDAC класса II; Lan-2 был более интенсивным, чем SHLA в COV434, и ни один из антагонистов не влиял на клетки KGN.
Заключение : SHLA и Lan2 устраняют негативное влияние лептина на сочленение HDAC в зависимости от типа клеток. Это основной отчет по тестированию блокаторов рецепторов лептина в качестве ингибиторов HDAC в клетках рака яичников.
Ключевые слова: Рак яичников, лептин, блокатор рецепторов лептина, экспрессия HDAC
Введение: Эпигенетические изменения, например, посттрансляционные изменения гистонов, могут играть важную роль в развитии рака. За ацетилирование гистонов отвечают два набора химических веществ: гистонацетилазы (HAT) и гистондеацетилазы (HDAC). Превосходство HDAC над HAT побудило ограничить запись нескольких качеств, ответственных за сокрытие канцерогенеза. Более того, HDAC также ответственны за деацетилирование негистоновых белков, которые управляют движением клеточного цикла, размножением и апоптозом. HDAC млекопитающих делятся на четыре класса. HDAC 1, 2, 3 и 8 образуют класс I. HDAC 4-7, 9 и 10 образуют класс II. HDAC класса III являются NAD+-подчиненными катализаторами, также называемыми сиртуинами (SIRT). HDAC11, главный представитель HDAC класса IV, объединяет в себе основные моменты классов I и II.
A typical finding in cancer growth cells is the overexpression of HDACs and their expanded movement, prompting the modified articulation and action of various proteins associated with carcinogenesis. In spite of the fact that the information on the ovarian disease is developing, there is still no appropriate treatment for the counteraction and treatment of this sort of malignant growth. There is a developing group of proof indicating that the outflow of class I HDACs is expanded in ovarian carcinomas and this is associated not just with assuming a huge job in carcinogenesis, yet in addition to contributing toward protection from chemotherapeutic operators utilized for rewarding ovarian malignant growth. Jin et al. demonstrated that HDACs
from class I are overexpressed in ovarian disease tests versus tests got from sound people. Hayashi et al. uncovered that among the many tissue tests acquired from ovarian cancer growth patients, HDAC1 and HDAC2 are principally engaged with disease cell expansion, while HDAC3 is associated with cell movement forms. Hindering HDAC3 brings about the hindrance of disease cell movement. Likewise, HDAC articulation is expanded among patients with ovarian cancer growth that is impervious to platinum-based chemotherapy. Likewise, HDAC4 and HDAC6 are associated with ovarian malignant growth obstruction and movement. Lapinska et al. Demonstrated that mixed treatments with HDAC inhibitors might be successful against various sorts of ovarian cancer growths.
Materials and Methods
Materials: Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F-12) was gotten from Gibco by Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), RPMI-1640, fetal ox-like serum (FBS, heat-inactivated), penicillin, and streptomycin were gotten from Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Leptin was acquired from Sigma Chemical Co. Leptin receptor enemies (SHLA, Lan1, and Lan2) were acquired from Protein Laboratories Rehovot (PLR) Ltd. (Rehovot, Israel).
Cell culture: OVCAR-3 (set up from the harmful ascites of a patient with dynamic adenocarcinoma of the ovary after mix chemotherapy with cyclophosphamide) and CaOV-3 (an essential ovarian malignant growth cell line), were acquired from the American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). COV434 cells were gotten from the Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). The organic attributes of this cell line have been recently portrayed (20). KGN cells were gotten from Masatoshi Nomura and Hajime Nawata, Kyushu University, Japan (21). CaOV-3 cells were routinely refined in DMEM with 10% FBS, and OVCAR-3 in RPMI-1640 enhanced with 20% FBS. COV434 cells were routinely refined in DMEM + 2 mM Glutamine + 10% FBS. KGN cells were routinely refined in DMEM/F-12 + 10% FBS. Cells were developed in 75 cm2 tissue culture dishes (Nunc, Denmark) in a 37�?C hatchery with a humidified blend of 5% CO2:95% air.
qPCR analysis: Basal HDAC quality articulation and the declaration of HDACs qualities affected by leptin and leptin rivals was dictated by qPCR. Cells were seeded into 96-well culture plates at a thickness of 1.5×104 cells/well (CaOV-3), 1.5×103 cells/well (OVCAR-3), 8×103 cells/well (COV434) and 1.5×104 cells/well (KGN) mulling over the size of cells and the populace multiplying time. The following day, the medium was changed and cells were treated with leptin at a portion of 40 ng/ml alone or with SHLA and leptin.
Western blot analysis: Cells were plated into 24-well plates at a thickness of 2×105 (CaOV-3), 3.5×104 (OVCAR-3 cells), 4×104 (COV434 cells) and 6×104 (KGN cells) and permitted to connect for the time being. On the next day, the media were changed and cells were treated with 40 μg/ml leptin alone or in mix with 1,000 μg/mL SHLA or Lan2. To look at HDAC protein articulation, cells were hatched for 48 h. After brooding, cells were washed with super cold PBS and lysed with Laemmli lysis cradle (Sigma Chemical Co.). The lysed cells were then scratched, moved to microtubes and put away at – 70�?C until analysis.
Equal amounts of protein (50 μg) from every treatment bunch were isolated by SDS-PAGE and moved to PVDF layers utilizing the Bio-Rad Mini-Protean 3 mechanical assembly (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA). Smudges were brooded for the time being with essential antibodies explicit to HDAC5, HDAC6 and HDAC7 (#20458S, #7558S, #33418S Cell Signaling Technology Inc., Beverly, MA, USA) at a 1:1,000 weakening. After hatching with the essential immune response, layers were washed multiple times with 0.1% Tween-20 in 0.02 M TBS cushion and brooded for 1 h with an enemy of hare horseradish peroxidase-conjugated auxiliary counter acting agent (#7074 Cell Signaling Technology Inc.; weakening 1:2,000).
Histone deacetylase activity assay: HDAC activity was estimated utilizing the In Situ HDAC Activity Fluorometric Assay Kit (EPI003, Sigma Chemical Co.). The measures of fluorescent item were estimated utilizing a fluorescence microplate peruser (FLx800 Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA) at an excitation frequency of 368 nm and an outflow frequency 442 nm. All examples were run in quadruplicate at a similar examine.
Statistical analysis: Information was communicated as mean±SEM from the four autonomous investigations acted in triplicate. Measurable examinations were performed utilizing GraphPad Prism 5. Information was investigated utilizing a two-path examination of fluctuation (ANOVA) trailed by a Tukey's actually critical contrast (HSD) various range test. An estimation of p<0.05 was considered factually critical.
Результаты: Влияние врагов лептина и рецепторов лептина на качество HDAC и артикуляцию белка в клетках эпителиального рака яичников. В клеточной линии OVCAR-3 утверждение всех исследованных HDAC было в целом выше, чем в клетках CaOV-3, с наиболее примечательным утверждением, отмеченным для HDAC 1, 2, 3 и 7. Лептин расширил утверждение качеств HDAC 1, 7 и 9. Из бывших в употреблении блокаторов SHLA не только изменил стимулирующее влияние лептина на качества и белки HDAC 1 и 9, но также уменьшил утверждение качества HDAC 4, качества и белка HDAC 5 и белка HDAC6. Lan-2 не оказал влияния на артикуляцию качества HDAC, но было отмечено сильное ингибирующее влияние на утверждение белка HDAC9.
Обсуждение: Повышенная артикуляция многочисленных белков класса HDAC была обнаружена в 60–90 % опухолей яичников, а также были выявлены многочисленные изменения, связанные и не связанные с гистонами, которые изменяют выравнивание развития и выносливости клеток.
Представленная информация ясно указала на более высокое качество сочленения HDAC в эпителиальных, чем в гранулезных клетках. Кроме того, они продемонстрировали, что в химиорезистентной клеточной линии OVCAR-3 отток всех исследованных HDAC был существенно выше, чем в основных клетках CaOV-3, с наиболее примечательной артикуляцией, отмеченной для HDAC 1, 2, 3 и 7. В клетках гранулезной опухоли более низкое сочленение HDAC наблюдалось во взрослой структуре, чем в подростковой структуре, с наиболее примечательной артикуляцией HDAC9, обнаруженной в клетках COV434. За исключением высокого сочленения HDAC7 в OVCAR-3 и HDAC9 в COV434 из класса II, во всех случаях утверждение HDAC из класса I было выше, чем из класса II. Большинство исследований указали на улучшенное сочленение HDAC класса I в сильных опухолях человека и в частных прогрессирующих, дедифференцированных, резко размножающихся опухолях. Появляется все больше доказательств того, что отток HDAC класса I увеличивается при карциномах яичников, и это связано не только с выполнением важной роли в канцерогенезе, но и с
способствуя защите от специалистов по химиотерапии, используемых для поощрения роста рака яичников. Это согласуется с нашим восприятием того, что наиболее повышенная артикуляция наблюдалась в клетках OVCAR-3.
Эта работа частично представлена на 29-м Европейском глобальном саммите по терапии рака и радиационной онкологии, который состоялся 23–25 июля 2018 г. в Риме, Италия.