Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Исследование принудительной деградации моноклональных антител с использованием двумерной жидкостной хроматографии

Ан Ю, Верма С, Чен Ю, Ю С, Чжан Ю, Келнер С, Менгисен С, Ричардсон Д и Чен З

Продукты моноклональных антител (mAb) чрезвычайно гетерогенны из-за наличия различных ферментативных и химических модификаций, таких как дезамидирование, изомеризация, окисление, гликозилирование, гликирование, терминальная циклизация, агрегация и фрагментация. Исследование принудительной деградации является обычной практикой для оценки потенциальных модификаций и путей деградации mAb в экстремальных условиях, включая воздействие света и экстремальный локальный pH. Деградированные образцы подвергаются характеристике с использованием широкого спектра анализов, включая ионообменную хроматографию (IEC) для вариантов заряда и эксклюзионную хроматографию (SEC) для вариантов размера. В этом исследовании для подтверждения концепции подход двумерной жидкостной хроматографии (2D-LC) был успешно применен к образцам принудительной деградации mAb для оценки распределения размеров в профиле заряда IEC. Пики вариантов заряда в IEC первого измерения (1D) были фракционированы с помощью графика вырезания сердцевины, а интегрированная функция парковки пиков учитывала позднее элюирующие 1D разрезы, когда предыдущие все еще находились под анализом второго измерения (2D). Таким образом, для однократной инъекции IEC все фракции IEC были получены с помощью 2D для анализа SEC. Это исследование показало, что 2D SEC совместим с 1D IEC для анализа 2D-LC. Чувствительность метода была достаточной для определения агрегатов и фрагментов в каждом отдельном разрезе IEC. Рассчитанные общие агрегаты и фрагменты в образцах mAb-1, подвергнутых стрессу, были сопоставимы с теми, которые были обнаружены с помощью одномерной SEC. Самое главное, что подход 2D IEC-SEC был способен объединять варианты заряда и размера mAb в режиме реального времени и эффективно. Было отмечено, что агрегаты были обогащены в самой основной области в профиле заряда IEC, особенно в образцах с высокой степенью деградации. Насколько известно авторам, это первое применение IEC-SEC 2D-LC для анализа интактных антител.