Журнал клеточной науки и терапии
Открытый доступ

Абстрактный

Белок теплового шока (HSP) 72 проникает в ранние эндосомы, готовясь к высвобождению из клеток

Пунит Каур и Александр Асеа

Цель: Установить механизм, посредством которого гипертермия вызывает высвобождение Hsp72 в опухолеспецифических пептидах для доставки в антигенпрезентирующие клетки (APC). Материалы и методы: Клетки 4T1 scrb-shRNAGFP и Hsp72-shRNAGFP были введены в грудную подушечку самки мыши BALB/c для температурной кинетики мышей, подвергнутых HT, с использованием набора циркулирующей водяной бани и гипертермии, опосредованной нанооболочками. Базовую и вызванную теплом внутриклеточную экспрессию Hsp72 измеряли с помощью иммуноблоттинга с анти-Hsp72. Через четыре часа после лечения гипертермией (HT) определяли колокализацию Hsp72 с помощью ингибиторов, а экзосомы извлекали из супернатанта и измеряли уровни Hsp72. Размер опухоли измеряли после гипертермии. Результаты: В этом исследовании мы показываем, что высвобожденный Hsp72 находится в двух формах: 1) в высокоиммунологически активных экзосомах, которые, как известно, обогащены комплексами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I и II, костимулирующими молекулами (CD40, CD80, CD86) и, в частности, членами семейства HSP70 (включая Hsp72, Hsp73, Hsp75, Grp78) и семейства HSP90 (включая Hsp82, Hsp90, Grp96, Grp98) и, 2) как Hsp72-PC, в котором свободный Hsp72 сопровождает опухолеспецифические пептиды. Кроме того, мы показываем, что воздействие гипертермии (41 °C, 60 мин) на опухоли, несущие 4T1, вызывает значительную регрессию опухоли (p < 0,05) по сравнению с мышами, несущими 4T1, содержащимися при температуре окружающей среды (25 °C, 60 мин). Однако повторная инъекция мышам с опухолью 4T1 антитела против Hsp72 отменила регрессию опухоли, вызванную гипертермией. Образцы крови, взятые в разное время, подтвердили, что блокирующее антитело значительно снизило уровень Hsp72 в плазме. Выводы: Наши результаты свидетельствуют о том, что гипертермия стимулировала регрессию опухоли, отчасти, стимулируя высвобождение Hsp72 из опухолей, который поглощается APC в качестве подготовки к активации цитотоксических реакций CD8+ CTL против опухолей. Поскольку HSP обнаруживаются во всех клеточных организмах, это, вероятно, применимо для профилактики/лечения заболеваний сельскохозяйственных животных. Ожидается, что это будет способствовать более широкому пониманию путей внутриклеточного трафика как подхода к терапии.