Передовые методы в биологии и медицине
Открытый доступ
ISSN: 2379-1764
ISSN: 2379-1764
Анурак Чеойманг, Надда Мухамад, Интуон Кулама, Кесара На-Бангчанг*
Целью исследования было создание высокопроизводительного метода биоанализа для определения общей биоактивности Atractylodes lancea (AL) в образцах сыворотки человека. Кроме того, был также разработан простой метод ВЭЖХ-УФ для определения концентрации в плазме атрактилодина (ATD), основного биоактивного компонента AL. Для метода биоанализа в качестве тестового организма использовался штамм Staphylococcus aureus (S. aureus) ATCC 25923. Ингибирование роста бактерий оценивалось с помощью анализа МТТ. Калибровочная кривая была подготовлена на основе кривой зависимости концентрации от концентрации в сыворотке (0, 0,39, 0,78, 1,56, 3,13, 2,56 и 50 нг/мкл), которая была линейной с коэффициентами корреляции лучше 0,990. Предел количественного определения (LOQ) составил 1,66 мкг/мл с использованием образцов сыворотки объемом 20 мкл. Процедура анализа ВЭЖХ-УФ была разработана на основе обращенно-фазовой хроматографии с использованием колонки Hypersil Gold C18 и элюирующего растворителя, состоящего из ацетонитрила и воды в соотношении 70:30 (об.:об.). УФ-детектирование было установлено на длине волны 340 нм. Калибровочная кривая была подготовлена на основе кривой концентрация-ответ в сыворотке (0, 0,39, 0,78, 1,56, 3,13, 2,56 и 50 нг/мкл), которая была линейной с коэффициентами корреляции (r) лучше 0,990. LOQ составил 2,5 нг/мл с использованием образца плазмы объемом 1 мл. Оба метода анализа были специфическими, чувствительными, точными и воспроизводимыми количественными анализами сывороточной биологической активности AL и плазменных концентраций ATD. Методы были успешно применены для фармакокинетического исследования общей биологической активности (антихолангиокарциномной активности) экстракта АЛ у пяти пациентов с холангиокарциномой на поздней стадии.