Журнал противовирусных и антиретровирусных препаратов
Открытый доступ

Абстрактный

Инфекционные полноразмерные клоны вируса крапчатости калибрахоа (CbMV)

Анджу Гулати-Сакхуджа и Хсинг-Йе Лю

Полноразмерные клоны ДНК, полученные из геномной РНК (гРНК) и субгеномных РНК (сгРНК) вируса крапчатости Calibrachoa (CbMV), были сконструированы под контролем промотора РНК T7 и лигированы в плазмиду pUC-18. Кэпированные и некэпированные транскрипты in vitro, синтезированные из полноразмерного геномного клона ДНК pUC-CbMV-FL, генерировали хлоротические локальные поражения на механически инокулированных Chenopodium quinoa в течение 10–15 дней после инокуляции. Потомственные вирионы, извлеченные из инокулированных симптоматических листьев, имели те же морфологические свойства, что и родительские вирионы. Эти вирионы также положительно реагируют с антисывороткой CbMV в иммуноферментном анализе с двойными антителами и сэндвичем (DAS-ELISA), а вирусный белок оболочки был обнаружен с помощью вестерн-блоттинга. Наличие пяти открытых рамок считывания (ORF) в геноме CbMV и синтез соответствующих белков gRNA и sgRNA были подтверждены с помощью нозерн-блоттинга и трансляции in vitro. Также был определен сайт начала транскрипции трех sgRNA CbMV. Успешное построение полноразмерного инфекционного клона cDNA CbMV позволяет разрабатывать молекулярные инструменты, которые можно использовать для понимания функций генов этого вируса.