Внутренняя медицина: открытый доступ
Открытый доступ

Абстрактный

Молекулярное типирование с использованием ПЦР-ПДРФ выявило разнообразие микобактерий окружающей среды, вызывающих язву Бурули в Кот-д'Ивуаре (Западная Африка).

Кине Грегуар, Каку Нгазоа Э Соланж, Ака Нгуетта, Ваку Сабин, Кулибали Нголо Давид, Куаку Элен, Силла Абубакар, Фэй-Кетт Ортенс, Аусси Серж, Доссо Мирей

Язва Бурули — это забытое кожное заболевание, вызываемое Mycobacterium ulcerans (MU), которым ежегодно заболевают 1000 человек по всему миру, особенно в странах Африки. Искоренение язвы Бурули затруднено из-за отсутствия ранней диагностики в сельских эндемичных регионах и неизвестности этого заболевания в национальной системе здравоохранения. В сельских водно-болотных угодьях и болотах Центральной и Западной Африки больше всего страдают дети. MU относится к экологическим микобактериям, продуцирующим миколактон (MPM), и характеризуется высоким генетическим разнообразием циркулирующих штаммов. Диагнозы устанавливались путем культивирования и обнаружения генома с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР стала золотым методом для подтверждения клинических и экологических образцов для MU. Метод MIRU-VNTR и полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (RFLP) в сочетании с маркерами MIRU-VNTR использовались для различения микобактерий из разных источников. Целью данного исследования было изучение молекулярного разнообразия различных источников микобактерий из окружающей среды, штаммов культур и клинических образцов с использованием комбинированного MIRU-VNTRTyping и RFLP. Всего 26 образцов (вода, осадок, штаммы микобактерий и мазок) из эндемичных участков были впервые подтверждены с помощью окрашивания IS2404 или по Цилю-Нильсену. Образцы были проанализированы с помощью ПЦР-типирования на предмет 4 специфических маркеров (MIRU-1, VNTR6, VNTR19, ST-1), а ампликоны были переварены эндонуклеазой рестрикции MspI и разделены электрофорезом в 3% агарозном геле для анализа ПЦР-RFLP. Наши результаты показали различную амплификацию с помощью VNTR-MIRU-типирования. Для образцов окружающей среды была обнаружена низкая амплификация на 25% для ПЦР-MIRU-1. Культуральные штаммы и клинические образцы имели скорость амплификации 35,7% и 62,5% соответственно. ST-1 имел лучший амплифицированный маркер для штаммов культуры на 71,4%, в то время как клинические образцы имеют хорошую скорость амплификации на 62,5% для всех маркеров. Профили ПЦР-ПДРФ клинических образцов были идентичны, в то время как штаммы окружающей среды и микобактерий показали разные профили ПЦР-ПДРФ. Мы разработали чувствительный к ПЦР-ПДРФ, более простой и недорогой подход для подтверждения генотипирования нетуберкулезных микобактерий в эндемичных странах для экологического скрининга. Мы предполагаем мутацию в повторяющихся локусах последовательности VNTR-MIRU и адаптацию микобактерий из окружающей среды к человеку. Это исследование подтверждает циркуляцию нескольких генотипов микобактерий в Кот-д'Ивуаре.