Журнал гликомики и липидомики
Открытый доступ

Абстрактный

Профили N-гликозилирования гликопротеинов куриного иммуноглобулина Y, экспрессируемых различными продукционными средствами

Сатико Кондо, Хирокадзу Яги, Юкико Камия, Акихико Ито, Мотоки Кухара, Аяко Кудо, Норико Такахаши и Коичи Като

Иммуноглобулин Y (IgY), в изобилии содержащийся в яичном желтке, широко используется в качестве иммунохимического реагента и недавно был оценен как потенциальный терапевтический инструмент. Fc-часть IgY сохраняет сайт N-гликозилирования в Asn407, который структурно эквивалентен сохраненным сайтам гликозилирования других классов Ig у млекопитающих. Несмотря на такое сходство, было показано, что IgY из куриной сыворотки и яичного желтка являются различными гликоформами, наилучшим примером чего является высокая частота моноглюкозилированных олигосахаридов с высоким содержанием маннозы, которые редко встречаются в гликопротеинах млекопитающих. Чтобы получить более полное представление о свойствах гликозилирования IgY, мы сообщаем о сравнительном профилировании N-гликозилирования рекомбинантных куриных IgY, которые имеют идентичные аминокислотные последовательности в своих вариабельных областях, но экспрессируются различными продукционными средствами. N-связанные олигосахариды, отщепленные от этих IgY, были подвергнуты многомерному картированию ВЭЖХ в сочетании с масс-спектрометрическим анализом. Профили N-гликозилирования IgY явно показали разные паттерны в зависимости от производственного носителя. В то время как IgY, экспрессируемый клетками куриной гибридомы, сохранял преждевременные олигосахариды с высоким содержанием маннозы, IgY, экспрессируемый клетками CHO, испытывал обширную обработку N-гликанов и демонстрировал высокие антеннарные олигосахариды. Значительные различия также наблюдались в уровнях фукозилирования ядра и биссекторного N-ацетилглюкозаминилирования и в типах сиалильных связей среди IgY, экспрессируемых различными носителями. Несмотря на такие различия, рекомбинантные антитела IgY обычно экспрессировали значительные популяции моноглюкозилированных гликоформ, что позволяет предположить, что эта особенность гликозилирования в некоторой степени связана с отличительной четвертичной структурой IgY-Fc, которая, по крайней мере частично, маскирует N-гликаны Asn407 и изолирует их от механизмов шаперона в эндоплазматическом ретикулуме. Мы предполагаем, что время и эффективность процессинга N-гликанов и формирования четвертичной структуры IgY значительно отличаются от таковых для IgE и зависят от носителей, используемых для получения рекомбинантного IgY, что приводит к различной частоте появления моноглюкозилированных видов.