Журнал противовирусных и антиретровирусных препаратов
Открытый доступ

Абстрактный

Новые мутации rtM204 в полимеразе HBV обусловливают снижение восприимчивости к адефовиру и тенофовиру

Кэ Чжан, Кристиан Бах, Мария Нойманн-Фрауне, Ючен Ся, Бастиан Беггель, Рольф Кайзер, Верена Шильдген, Андреа Кремер, Оливер Шильдген и Ульрике Протцер

Предыстория: Лечение хронической инфекции HBV ограничено выбором резистентности. Мутации rtM204I/V в мотиве YMDD обратной транскриптазы HBV являются хорошо документированными детерминантами резистентности к ламивудину и энтекавиру, но не к адефовиру или тенофовиру. Для последних двух препаратов доступны ограниченные систематические фенотипические данные.

Методы: мутации rtM204 (rtM204A/I/K/L/Q/S/T/V) были систематически введены в репликационно-компетентные конструкции с 1,1-кратным превышением длины HBV под контролем промотора CMV. Способность вирусной репликации определялась с помощью селективной ПЦР после нормализованной транзиентной трансфекции. Восприимчивость к препаратам in vitro оценивалась путем определения значений IC50 ламивидуна, энтекавира, адефовира и тенофовира с использованием стандартизированных высокопроизводительных фенотипических анализов. Инфекционность анализировалась путем инфицирования клеток HepaRG.

Результаты: Фенотипирование in vitro показало, что rtM204K придавал высокий уровень устойчивости к адефовиру и тенофовиру, но одновременно нарушал способность к репликации. Его приспособленность не могла быть восстановлена ​​rtL180M или rtL80I, как описано для rtM204I/V. rtM204L и rtM204Q придавали низкий уровень сниженной восприимчивости к адефовиру/тенофовиру без потери способности к репликации. rtM204A/I/S/T существенно снижал восприимчивость к любому из препаратов. Интересно, что одиночная мутация rtM204V показала значительно сниженную восприимчивость к обоим препаратам, но потеряла устойчивость в сочетании с компенсаторной мутацией rtL180M. Влияя на перекрывающийся ген S, мутанты rtM204, за исключением rtM204L, показали сниженную или уменьшенную инфекционность в клетках HepaRG.

Выводы: Мы разработали эффективный по времени и стоимости фенотипический анализ и идентифицировали новые мутации rtM204, обеспечивающие перекрестную резистентность к адефовиру и тенофовиру in vitro. Несмотря на их низкую частоту в вирусной популяции, их клиническое значение не следует недооценивать из-за потенциального отбора компенсаторных мутаций, которые могут восстановить вирусную приспособленность.