Журнал клеточной науки и терапии
Открытый доступ

Абстрактный

Нуклеолин переносит Hsp72 в плазматическую мембрану, готовя его к высвобождению в микросреду

Appukuttan NR Pradeep, Alexzander Asea and Punit Kaur

Цель: Наши предыдущие исследования показали, что тепловой стресс вызывает высвобождение Hsp72 из клеток с помощью механизма, независимого от классического пути транспорта белка. Однако точный механизм, с помощью которого Hsp72, белок без лидера, получает доступ к внеклеточной среде, остается неизвестным. Материалы и методы: Это исследование предназначено для определения механизма, с помощью которого происходит внутриклеточный транспорт Hsp72 и высвобождение. Данные, представленные в этом исследовании, предполагают внутриклеточный транспорт Hsp72 с использованием вестерн-блоттинга и проточной цитометрии. Кроме того, неизвестные мембраносвязанные белки были идентифицированы с помощью расщепления в геле и ЖХ-МС/МС. Результаты: Мы демонстрируем, что в течение 60 минут после первого воздействия на клетки теплового шока связанный с плазматической мембраной Hsp72 сбрасывается и перераспределяется в цитозольные отсеки. Ингибирование активного транспорта клеток путем предварительной обработки клеток цитохалазином B полностью отменило перераспределение Hsp72 из плазматической мембраны в цитозоль. Сшивание белков, связанных с плазматической мембраной, с Hsp72 с последующим анализом вестерн-блоттинга и анализом ЖХ-МС/МС выявило по меньшей мере семь взаимодействующих партнеров с Hsp72, включая нуклеолин, Hsp90, gp96, CAP2, TLR2, 4 и 7. Трансфекция клеток нуклеолин-siRNA полностью ингибировала базовое и вызванное тепловым шоком высвобождение Hsp72. Выводы: В совокупности это исследование впервые демонстрирует, что плазматическая мембрана действует как резервуар для Hsp72, и предполагает, что нуклеолин играет важную роль в транспортировке и высвобождении Hsp72.