Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Очистка и биохимическая характеристика ингибитора тиоловой протеиназы цистатинового типа из Cicer arietinum (нут)

Шераз А.Б., Васим Ф.Б., Алия С., Шахнаваз К.М., Ризван Х.К. и Билкис Б*

Цистатины являются ингибиторами тиоловых протеиназ, повсеместно присутствующими во многих растениях, а также в тканях животных. В настоящем исследовании цистатин, подобный ингибитору тиоловых протеиназ, был выделен из нута с использованием фракционирования сульфатом аммония (40-60%) и гель-фильтрационной хроматографии на колонке Sephacryl S-100 HR с выходом 21,09% и кратностью очистки 78,89. Он дал молекулярную массу около 25,3 кДа, как было определено с помощью SDS-PAGE, динамического рассеяния света (DLS) и из его поведения при гель-фильтрации. Было обнаружено, что ингибитор имеет очень низкое содержание углеводов (0,34%) и скудное количество (1,45%) сульфгидрильного содержания. Радиус Стокса, коэффициенты трения, диффузии и седиментации CPC составили 4,299 × 10 ^-8 г/с, 22,82 Å, 12,68 × 10 ^-7 см ² с ^-1 и 2,64 S соответственно. Кинетический анализ CPC с тиоловыми протеиназами (папаин, фицин, бромелаин) выявил обратимый и конкурентный режим ингибирования, при этом CPC показал самую высокую ингибирующую эффективность против папаина (Ki = 0,82 нМ), за которым следовал фицин (Ki = 17,6 нМ) и затем бромелаин (Ki = 41,3 нМ). CPC обладал примерно 25,34% содержанием α-спиралей, как было оценено с помощью спектроскопии CD. УФ-видимый и флуоресцентный спектры показали, что при образовании комплекса папаин-CPC происходит значительное конформационное изменение в одном или обоих белках комплекса.