Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Очистка и характеристика глутатион-S-трансферазы из печени крыс: влияние четыреххлористого углерода и верблюжьего молока

Мохамед Лебда, Набиль Таха, Саад Ноеман, Махди Коршом, Абд эль-Вахаб Мандур и Ахлам эль-Лебуди

Глутатион-S-трансферазы (GST) представляют собой многофункциональное семейство димерных и в основном цитозольных ферментов биотрансформации, которые играют важную роль в защите тканей от окислительного стресса. Они катализируют конъюгацию внутриклеточного глутатиона с большим количеством химических веществ, обладающих электрофильным центром, а конечные GSH-конъюгаты обладают повышенной гидрофильностью, что облегчает их дальнейший метаболизм и выведение. Наше исследование было проведено с целью очистки фермента GST из печени крысы с использованием одношаговой аффинной хроматографии и изучения ингибирующего эффекта четыреххлористого углерода и улучшающего эффекта введения верблюжьего молока. Очистка фермента GST показала, что концентрация белка в фильтрате аффинности GSH снизилась по сравнению с неочищенным экстрактом, в то время как удельная активность фермента увеличилась, что указывает на то, что одношаговая очистка отсекает другие белки и сохраняет белок фермента GST. CCL4 снижает Vmax и увеличивает Km как для субстратов GSH, так и для CDNB по сравнению с контролем, что указывает на то, что CCL4 может быть неконкурентным ингибитором фермента GST, в то время как верблюжье молоко увеличивает Vmax и уменьшает Km как для субстратов GSH, так и для CDNB, что указывает на то, что верблюжье молоко увеличивает сродство фермента к обоим субстратам. Активность GST увеличивалась с увеличением концентрации субстрата до достижения максимальной активности, после чего активность GST формировала плато. Что касается влияния температуры на активность GST, максимальная активность GST наблюдалась в диапазоне 25-35ºC и инактивировалась при температуре выше 40ºC. Активность GST увеличивалась при постепенном увеличении pH до достижения максимальной активности при значении pH 7,1 и уменьшалась при увеличении pH. Наш вывод указывает на то, что CCL4 является неконкурентным ингибитором фермента GST, в то время как верблюжье молоко увеличивает активность и сродство фермента к обоим субстратам.