Журнал медицинских методов диагностики
Открытый доступ

Абстрактный

Реактивный синий краситель: основные характеристики вакуолей в сперме человека

Сатору Канеко*, Юки Окада, Сатоши Ёкота, Киёси Такамацу

Цели: Справочное руководство ВОЗ по андрологии рассматривает контур головки сперматозоида как ключевой параметр для оценки мужского бесплодия и классифицирует внутренние вакуоли как дефекты головки. Характеристики вакуолей были неоднородны как среди отдельных индивидуумов, так и среди сперматозоидов. Настоящее исследование сообщило о некоторых уникальных свойствах реактивного синего 2 (RB2). Краситель продемонстрировал зависящую от pH клеточную специфичность для сперматозоидов и сперматид человека.

Материалы и методы: Сперматозоиды и сперматиды человека окрашивали RB2 при pH 10,0.

Результаты: RB2 окрашивал человеческую сперму и сперматиды, которые выглядели как полупрозрачные голубоватые тельца, но не окрашивал лимфоциты, в то время как внутренние вакуоли выглядели как бесцветные пятна. Окрашивание RB2 также выявило деградированные сперматиды, которые подверглись протаминации, но были остановлены до удлинения хвоста. Большинство образцов азооспермической спермы (16/23 случаев) включали сперму или деградированные сперматиды. Хотя особенности контура головки и вакуолей были гетерогенными у разных особей, окрашивание RB2 в присутствии 2,0 ммоль/л дитиотреитола повсеместно преобразовывало контур в овальную форму и приводило к исчезновению вакуолей, независимо от их исходных особенностей.

Заключение: Три сульфатных остатка в RB2 селективно взаимодействовали с гуанидильными остатками в Arg протаминов при pH 10. Клеточная специфичность была обусловлена ​​содержанием Arg в нуклеопротеинах. RB2 выявил контур головки и внутренние вакуоли сперматозоида и задержал сперматиды, которые подверглись протаминированию. Локальное нарушение дисульфидных поперечных связей может играть решающую роль в образовании вакуолей. Окрашивание RB2 открыло новые методы исследования спермиогенеза.