Передовые методы в биологии и медицине
Открытый доступ

Абстрактный

Восстановление экспрессии митохондриальных генов с использованием клонированного человеческого гена в мутантных клетках легких китайского хомячка

Заки А. Шериф и Кэролин В. Брум

Предыстория: Gal-32 — это ядерный мутант легочных клеток китайского хомячка, который не может расти в галактозе из-за дефекта синтеза митохондриального белка. Поскольку продукт гена Gal-32 был неизвестен, было необходимо использовать фенотипическую комплементацию для клонирования человеческого гена, который исправлял мутацию Gal-32.

Результаты: Рецессивные клетки Gal-32 были ко-трансформированы плазмидной ДНК pSV2-neo и рекомбинантной ДНК из геномной библиотеки человека, содержащей доминантный ген Gal+ человека и ген устойчивости к хлорамфениколу (camr), присутствующий в векторе pSV13. Первичные трансформанты были отобраны путем роста в галактозе и аналоге неомицина G418. Для того чтобы спасти ген Gal+ человека, была создана геномная библиотека с первичной трансформантной ДНК и космидным вектором pCV108. Ген camr использовался для идентификации клонов с близлежащими человеческими последовательностями. ДНК из двух клонов, гибридизующихся с camr, Alu, смогла трансформировать рецессивные клетки Gal-32 в фенотип Gal+ и восстановить синтез митохондриального белка.

Заключение: Эти данные демонстрируют выделение двух рекомбинантных клонов трансформанта pCV108, содержащих человеческий ген, который дополняет мутацию Gal-32 китайского хомячка и восстанавливает метаболизм галактозы.