Журнал медицинских методов диагностики
Открытый доступ
ISSN: 2168-9784
ISSN: 2168-9784
Сатору Канеко*, Киёси Такамацу
Цели: Провести сравнительные исследования для повторной проверки принципов и количественных показателей теста дисперсии хроматина сперматозоидов (SCD) и анализа комет (CA).
Методы: Человеческая сперма без и с гранулярными фрагментами на конечной стадии фрагментации была очищена из нормозооспермической спермы и использована в качестве естественного отрицательного и положительного контроля (NC и PC соответственно). Как SCD, так и CA извлекли нуклеопротеины с 2,0 моль/л NaCl, 1,0 ммоль/л DTT. SCD определил, что повреждение ДНК обратно пропорционально площади фиолетового гало. CA оценил уровень повреждения ДНК электрофоретически по количеству гранулярных фрагментов; так называемый хвост кометы, их электрофоретические характеристики сравнивали с одноклеточным импульсным гель-электрофорезом (SCPFGE).
Результаты: Фиолетовый ореол в SCD был определен как состоящий из нуклеопротеинов, окрашиваемых кристаллическим фиолетовым (CV), которые прилипли к облученным волокнам ДНК. SCD не смог отличить NC от PC. Остаточные нуклеопротеины блокировали миграцию ДНК в естественном CA; в отличие от этого, SCPFGE с триптическим расщеплением в геле высвобождал волокнистые и гранулярные фрагменты за пределы удлиненных волокон ДНК. Щелочной CA запускали ДНК в 0,3 моль/л NaOH. Хотя ДНК была измельчена до гранулярных фрагментов, остаточные нуклеопротеины сохранили свою связывающую способность с ДНК и по-прежнему фиксировали вновь образованные фрагменты.
Заключение: Анализы фрагментации ДНК требуют измерения ранней стадии фрагментации в разделенных подвижных сперматозоидах, отсутствие протеолиза снижает количественные характеристики нейтральной и щелочной CA. В целом, результаты показали, что SCD и CA были недостаточно чувствительны в качестве инструментов для сбора данных для клинической статистики.