Анатомия и физиология: текущие исследования
Открытый доступ
ISSN: 2161-0940
ISSN: 2161-0940
Сакара Тунсофон и Илка Немере
Протеинкиназа C (PKC) участвует в быстрой 1,25(OH)2D3-опосредованной экструзии кальция в эпителиальных клетках кишечника цыплят. В предыдущем отчете было показано, что перераспределение PKC a и PKC b соответствовало кривой доза-реакция для экструзии кальция. Мы исследовали роль как PKC a, так и PKC b в гормон-стимулированной экструзии кальция с помощью siRNA в первичных культурах кишечных клеток. Результаты показали, что не было никаких изменений в экструзии кальция в клетках, трансфицированных siRNA к PKC a, тогда как siRNA к PKC b значительно снизила экструзию кальция в клетках, обработанных 1,25(OH)2D3, по сравнению с соответствующими обработанными гормоном клетками в трансфицированных и нетрансфицированных клетках (P < 0,01). Аналогичные результаты были также получены при использовании химических ингибиторов PKC a (сафингол) и PKC b ([3-(1-(3-имидазол-1-илпропил)-1H-индол-3-ил)-4-анилино-1H-пиррол-2,5-дион]) в суспензии клеток кишечника. Результаты показали, что PKC b ингибирует вытеснение кальция (что приводит к увеличению поглощения кальция) из клеток кишечника, обработанных 1,25(OH) 2 D 3 , по сравнению с контрольной группой-носителем (P < 0,001), блокатор PKC a не показал никакой разницы в вытеснении кальция среди групп лечения. Используя конфокальную микроскопию, мы сократили воздействие гормона до 30 секунд, чтобы увидеть перераспределение PKC a и PKC b . Было обнаружено, что быстрое перераспределение PKC a значительно увеличивает флуоресценцию в апикальной области мембраны после 30-секундного воздействия на клетки 300- или 650 пМ 1,25(OH)2D3 (P < 0,01 и 0,001 соответственно). Для сравнения, было обнаружено, что иммунофлуоресценция PKC b значительно увеличивается в базально-латеральной области клеток по сравнению с контрольной группой после воздействия на клетки 300- (P < 0,01) или 650 пМ (P < 0,05) секостероида. Результаты показывают, что PKC a является изотипом PKC, участвующим в опосредованном 1,25(OH)2D3 оттоке кальция в эпителиальных клетках кишечника.