Журнал периоперационной медицины
Открытый доступ

Абстрактный

Скрининг гена β-глобина (HBB) на редкие мутации у пациентов с β-талассемией по принципу гемоглобина S D-Punjab с использованием секвенирования по Сэнгеру

Зишан Ансар

Цель: β-талассемия — это аутосомно-рецессивное заболевание, приводящее к образованию аномального гемоглобина из-за распространения различных мутаций, обнаруженных в гене HBB. Эти мутации делают пациентов неспособными производить правильную форму гемоглобина. Целью данного исследования было выявление мутации гена HBB у пациентов с β-талассемией, не включенных в панель мутаций ARMS PCR, путем секвенирования кодирования HBB, интрона и промотора.

Метод: Всего 10 образцов, ранее протестированных на мутации гена HBB с помощью ARMS PCR common-panel (т.е. IVS 1-1, IVS 1-5, кодон 8/9, кодон 41/42 и делеция 619bp), были проанализированы. с помощью секвенирования по Сэнгеру. Два здоровых субъекта были включены в качестве отрицательных элементов управления. Геномная ДНК была выделена, а ген HBB был амплифицирован. Очищенные на колонке амплифицированные продукты использовались для двунаправленного циклического секвенирования (Big Dye Terminator, ABI, США).

Результаты: В настоящем исследовании было проанализировано на общей сложности 10 образцов. Четыре были мужчинами и шесть женщинами. Пациенты среднего возраста составили три года. Всем пациентам ставился диагноз большой β-талассемии на основании их семейного анамнеза, клинических и лабораторных данных. В среднем пациенты применяют переливание крови женщинам в течение двух недель. Это произошло из-за семи редких мутаций в гене HBB, включая точечные мутации. Мутации охватывали промоторную область HBB:c.138C>A (-88 C>A), экзон 1 HBB:c.17_18delCT (кодон 5 –CT), HBB:c.47G>A (кодон 15 G>A), HBB: c.92G>C (кодон 30 G>C), HBB:c.50A>C (CAP+1 A>C), экзон 2 HBB:c.118C>T (кодон 39) и интрон 2 HBB:c.315+1G>A (IVS II-I G>A) и гетерозиготные изменения в кодоне 6 (GAG→GTG), а также гетерозиготные изменения в кодоне 121 (ГАА→САА). Все контролирующие субъекты определяют нормальную последовательность изменений гена HBB. Кроме того, полиморфизм T>C в кодоне 3 в позиции HBB: c.59 был обнаружен у большинства пациентов и контрольной группы.

Заключение: Хотя ARMS PCR является быстрым и общепринятым методом, обнаруживающим обнаруженные мутации в гене HBB, некоторые подгруппы пациентов могут быть пропущены из-за редких мутаций, для диагностики которых потребуются другие средства. Секвенирование по Сэнгеру является лучшим и надежным методом лечения таких пациентов.