Передовые методы в биологии и медицине
Открытый доступ

Абстрактный

Скрининг мутаций/SNP с помощью спектрофотометрического анализа кривой плавления: предварительное исследование неэлектрофоретического и бескрасочного метода обнаружения мутаций

Ариф Ахмад*, Мохаммад Шахид, Мохаммад Раиш и Сайед Ахтар Хусейн

Доступные в настоящее время методы скрининга мутаций требуют флуоресцентно меченого зонда/красителя или электрофореза или того и другого, что делает эти методы утомительными, дорогими и трудоемкими. Здесь мы описали метод скрининга мутаций/SNP без необходимости зонда/красителя и электрофореза. Для этой методики требуются только продукт ПЦР и спектрофотометр с Пельтье. Мы проводили скрининг мутаций, отслеживая профиль плавления ДНК и температуру перехода гомодуплекса и гетеродуплекса, регистрируя поглощение УФ плавящимся дуплексом. Поглощение для каждого дуплекса измерялось при 260 нм от 60°C до 85°C с шагом температуры 1°C с использованием спектрофотометра с Пельтье со скоростью нагрева 1°C/мин. В образцах гетеродуплексов наблюдается быстрое увеличение поглощения УФ при температурах перехода 70°C. В то время как в образце гомодуплекса оно достигается после 75°C. Мутация в образце была обнаружена путем наблюдения за уменьшением температуры перехода образцов гетеродуплексов по сравнению с гомодуплексом.