Журнал клинической и клеточной иммунологии
Открытый доступ

Абстрактный

Стабильная экспрессия и характеристика оптимизированного рецептора маннозы

Дэвид Дж. Вигеруст, Шерелл Вик и Вирджиния Л. Шепард

Рецептор маннозы (MR) — это поверхностный рецептор макрофагов, который распознает молекулярные паттерны, ассоциированные с патогенами (PAMPs) из разнообразного ряда бактериальных, грибковых и вирусных патогенов. Функциональные исследования MR затруднены из-за нехватки линий клеток человека, которые экспрессируют рецептор. Современные модельные системы, доступные для изучения биологии MR, часто демонстрируют низкие уровни экспрессии и не сохраняют многие классические свойства MR. Хотя несколько лабораторий сообщили о временной и стабильной экспрессии MR из плазмид, предварительные данные из нашей лаборатории показывают, что эти плазмиды производят белок, в котором отсутствуют критические домены, и который часто нестабилен с течением времени. В этом текущем отчете мы описываем создание и характеристику новой человеческой кодон-оптимизированной системы для временной и стабильной экспрессии MR. Редкие кодоны и последовательности, которые способствуют нестабильности мРНК, были модифицированы для получения мРНК, которая качественно и количественно улучшена. Конфокальная визуализация временного и стабильно экспрессируемого оптимизированного рецептора демонстрирует распределение, соответствующее предыдущим отчетам. Чтобы продемонстрировать функциональные характеристики оптимизированного рецептора, мы далее показываем, что введение оптимизированной по кодонам плазмиды MR может придать MR-ассоциированный фагоцитоз S. aureus нефагоцитирующим клеткам HeLa. Мы показываем, что три молекулы участвуют в вовлечении и интернализации S. aureus . Было обнаружено, что MR колокализуется с Toll-подобным рецептором 2 (TLR2) и Rab5 после воздействия окрашенного pHrodo S. aureus , что предполагает сотрудничество между тремя молекулами для вовлечения и интернализации бактериальной частицы. В этом исследовании описывается способный к трансфекции, оптимизированный рецептор MR с функциональными характеристиками, аналогичными рецептору дикого типа, и далее демонстрируется новая система для дальнейшего изучения биологии и функции MR.