Журнал клеточной науки и терапии
Открытый доступ

Абстрактный

Слитый белок TATκ OCT-3/4 и KLF-4: стабильные смешанные популяционные клеточные линии, способные доставлять слитые белки в клетки-мишени

Фазлина Нордин, Джи Джун Тай, Джуп Гакен и Фарзин Фарзане

Быстро растущий объем доказательств показал, что усиленная экспрессия небольшой панели генов, включая Oct-3/4, KLF4, Sox2 и c-Myc, может вызывать перепрограммирование ранее дифференцированных клеток для генерации индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC). Однако генерация iPSC путем генетических модификаций повышает риск злокачественной трансформации. Поэтому эффективное перепрограммирование дифференцированных клеток in vitro без необратимой генетической модификации крайне желательно. Улучшенный трансактиватор транскрипции каппа (TATκ), синтетический TAT-HIV, дает возможность доставлять несколько белков в целевые клетки, таким образом, делая его потенциальным альтернативным механизмом доставки для факторов транскрипции или терапевтических агентов. Используя зеленый флуоресцентный белок (GFP) и апоптин в качестве модельных белков, мы недавно описали стратегию создания клеточных линий, которые секретируют белки, несущие модифицированный домен трансдукции белка HIV-TAT (PTD) для последующего поглощения опосредованного трансдукцией белка целевыми клетками. Используя эту стратегию, мы получили клетки 293T, секретирующие плюрипотентные факторы Oct-3/4 или KLF4 в слиянии с TATκ. Oct-3/4 и KLF4 были обнаружены в культуральной среде трансдуцированной клетки 293T, а поглощение Oct-3/4 гемопоэтическими линиями клеток JURKAT и FDCP-1 было подтверждено анализом вестерн-блоттинга. KLF4 присутствовал в культуральной среде продуцирующей клетки 293T, но мы все еще не можем продемонстрировать поглощение целевыми клетками. Основываясь на полученных результатах, мы надеемся, что эти стабильные смешанные клеточные линии могут сыграть важную роль в генерации iPSC для терапевтических целей.