Журнал фармацевтической помощи и систем здравоохранения
Открытый доступ

Абстрактный

Процедура получения наночастиц ноисомы методом микрофлюидного смешивания для доставки siRNA

Мохаммад А. Обейд

Интерференция РНК включает деградацию целевой информационной РНК посредством включения коротких интерферирующих РНК (siRNA) [1]. Интерференция РНК (RNAi), самый популярный биологический инструмент, с помощью которого двухцепочечная РНК (dsRNA) вызывает подавление генов, нацеливаясь на комплементарную мРНК для деградации, является колоссальной инновацией в универсальном терапевтическом лечении заболеваний и преобразует способ, которым исследователи изучают функцию генов. Расширяя информацию о субатомных компонентах эндогенного импеданса РНК, siRNA разрабатываются как воображаемые нуклеиновые едкие лекарства для лечения смертельных заболеваний, например, злокачественных новообразований.

Малые интерферирующие РНК (siRNA) — это ошибочно объединенные двойные заброшенные атомы РНК длиной 19–23 нуклеотида. Они обычно используются в субатомной науке для временного успокоения качества интриги. Они вызывают реакцию РНК-интерференции после официального их объективного транскрипта, зависящего от комплементарности последовательности. Они были надлежащим образом использованы для рассмотрения воздействия различных онкогенных lncRNA через потерю емкости.

siRNA дала новые шансы на улучшение изобретательных лекарств для лечения заранее серьезных заболеваний, например, злокачественного роста. Она имеет естественную интенсивность, поскольку она неправильно использует эндогенный путь РНКi, позволяет явно снизить связанные с болезнью качества и подходит для любого качества с коррелятивным расположением. Для основы лечения качества с вмешательством siRNA наследственная природа заболевания предлагает сильную помощь. По правде говоря, различные siRNA были предназначены для нацеливания на преобладающие онкогены, вирусные онкогены, связанные с канцерогенезом, или онкогены с мальпрактическим направлением.

Механизм:

Начальный этап РНК-интерференции включает обработку и расщепление более длинной двойной заброшенной РНК в siRNA, в общем и целом несущей 2-нуклеотидный выступ на 3′ конце каждой нити. Белок, отвечающий за эту обработку, — это катализатор, подобный РНКазе III, называемый Dicer. В момент формирования siRNA ограничиваются комплексом мультипротеиновой части, называемым RISC (РНК-индуцированный комплекс торможения). Внутри комплекса RISC нити siRNA изолируются, и нить с более устойчивым 5′-концом обычно включается в динамический комплекс RISC. Антисмысловая одиночная заброшенная часть siRNA в этой точке контролирует и регулирует комплекс RISC на целевой мРНК, и посредством активности синергистического белка RISC, представителя семейства аргонавтов (Ago2), мРНК разрезается.

Методы:

NISV были созданы с помощью микрофлюидного смешивания, которое является недавно созданной техникой, используемой для получения готовых липидных наночастиц и приводит к созданию маленьких пузырьков с эффективным примером восстановительного оператора. Чтобы получить готовый NISV, были объединены явные объемы из каждой исходной компоновки частей NISV для создания липидной стадии. Липидная стадия была введена в основной залив, а жидкая стадия — во второй отсек микрофлюидного микромиксера, при этом температура смешивания была установлена ​​на уровне 50 °C. Пропорции скорости потока (FRR) между водной и естественной стадиями были установлены на уровне 3:1, а общие скорости выходного потока (TFR) двух стадий были установлены на уровне 12 мл/мин. Это учитывает быстрое смешивание между двумя стадиями при высоких скоростях потока и при температуре в течение стадии развития липидов. Затем рассеивания собирали из выходного потока и быстро ослабляли, чтобы уменьшить содержание последнего этанола в планировании до 6,25% (об./об.). Оценка цитотоксичности NISV была завершена на немаленьких клетках злокачественности легких (A549) и клетках меланомы мышей (B16-F10-LUC). siRNA, фокусирующаяся на зеленом флуоресцентном белке (GFP) в клетках copGFP-A549 или люциферазе в клетках B16-F10-LUC, была типизирована в NISV. Ограничение сочленения GFP с помощью siRNA против GFP (siGFP), передаваемой с использованием NISV, оценивали с помощью проточной цитометрии, полимеразной цепной реакции и вестерн-окрашивания. Голые мыши BALB/c, вакцинированные клетками B16-F10-LUC, которые вызывают меланому, передающую люциферазу, использовались для исследования способности NISV передавать siRNA in vivo.

Результаты:

Анализ цитотоксичности показал, что NISV не были вредны при концентрации 40 мкг/мл или ниже. Определения NISV показали высокую эффективность иллюстрации siRNA. Анализ с использованием флуоресцентной увеличительной линзы и поточной цитометрии продемонстрировал высокий захват клеток клетками по сравнению с голой siRNA, которая не была захвачена клетками. NISV имел возможность передавать siGFP клеткам и полностью подавлять сочленение GFP. Эти результаты были подтверждены путем трансфекции клеток B16-F10-LUC, создающих люциферазу, с помощью siRNA против люциферазы (siLUC). Оценка степени сочленения люциферазы после трансфекций siLUC с использованием структуры измерения белка люциферазы эффективно продемонстрировала сокрытие сочленения люциферазы. Затем NISV были использованы в тестах in vivo с использованием голых мышей BALB/c. После внутриопухолевой инфузии siLUC был доставлен в клетки и подавил артикуляцию люциферазы на существенно более высоком уровне, чем мыши, вознагражденные открытым siLUC. Эти результаты in vivo подтверждают способность NISV эффективно доставлять siRNA в цитоплазму целевых клеток и подавлять целевой белок.

Заключение:

NISV были широко представлены и просто потому, что их можно использовать в качестве транспортной структуры для siRNA. Эти результаты показали, что NISV можно использовать для преодоления препятствий, например, низкой устойчивости и плохого захвата клетками, в терапии на основе siRNA.