Дж. М. Варнеке
Введение: Нематода Strongyloides stercoralis является возбудителем стронгилоидоза, который может проявляться у людей дерматологическими, легочными и кишечными симптомами, часто переходящими в хроническое заболевание. Диагностика заражения Strongyloides stercoralis обычно проводится путем обнаружения личинок паразита в лице. Выход личинок на несколько порядков меньше, чем, скажем, выход яиц Ancylostoma duodenal, поэтому чувствительность обычных методов низкая. Чувствительность повышается за счет специфических методов, но инфекцию все равно можно пропустить. Стронгилоидоз может быть потенциально серьезной инфекцией у пациентов с ослабленным иммунитетом. Таким образом, желательно наличие чувствительных и специфических диагностических методов, особенно в контексте пациентов с ослабленным иммунитетом, у которых диагностика и лечение стронгилоидоза имеют первостепенное значение. Особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Целью данного исследования была оценка серологических и молекулярных методов диагностики человеческого стронгилоидоза в образцах от пациентов с ослабленным иммунитетом, которые ранее были проанализированы паразитологическими методами. В данном исследовании серологические и молекулярные инструменты использовались для диагностики. Несколько серологических методов, поскольку микроскопия кала и методы культивирования не обладают чувствительностью; обнаружение ДНК продемонстрировало воспроизводимые результаты с высокой чувствительностью и специфичностью; обнаружение сывороточных антител рассматривается как суррогат для диагностики; извлечение ДНК проводилось в соответствии с ранее описанным методом 12 . Вкратце, приблизительно 500 мг образцов кала, сохраненных в 70% этаноле, дважды промывались в PBS. Полученный осадок использовался для извлечения ДНК; мы оценили точность пяти различных серологических тестов, также используя составной эталонный стандарт, нематоду, широко распространенную по всему миру, в районах, где плохие гигиенические условия позволяют поддерживать ее передачу. У человека инфекция характеризуется аутоинфекционным циклом, который может привести к пожизненному носительству паразита, если его не лечить, полученному путем объединения результатов различных тестов. Недавно разработанный NIE-LIPS показал практически 100% специфичность, с чувствительностью >80% инфекций Strongyloides. Здесь мы оценили аналитическую эффективность совершенно уникального анти-Strongyloides IgG ELISA.
Методы: Anti-Strongyloides ELISA IgG (Euroimmun AG, Любек, Германия) основан на антигене, полученном из S. papillosus. Чувствительность и специфичность ELISA были оценены в идеале тест должен стать отрицательным или последовательно показывать заметное снижение титра в предсказуемое время после успешного лечения. Субстрат фермента, орто-фенилендиамин с 0,03% перекисью водорода в 0,1 моль/л цитрат-фосфатном буфере Хотя некоторые исследования документируют снижение титра антител после эффективного лечения, несколько исследований подтверждают идею о том, что обнаружение паразитоспецифических антител может быть полезным дополнением к паразитологической диагностике Диагностические иммунологические методы включают иммуноферментный анализ четкое пороговое значение еще не определено по сравнению с серологическим эталонным стандартом, применяемым в Институте паразитологии Бернского университета, Швейцария. Правильное диагностическое тестирование имеет решающее значение как для выявления лиц, инфицированных S. stercoralis, так и для оценки распространенности инфекции среди населения. Одной из основных проблем с S. stercoralis является то, что его общая распространенность, вероятно, недооценена, панель чувствительности составлена в основном из-за отсутствия чувствительности тестов на основе фекалий, которые являются наиболее часто используемыми оценками для инфекции S. stercoralis. Серологические тесты также очень полезны, но их специфичность варьируется сыворотки с положительными антителами к антителам к Strongyloides в соответствии с референтным внутренним ИФА. Панель специфичности/перекрестной реактивности включала 39 контрольных сывороток, классифицированных как отрицательные на антитела к антителам к Strongyloides или положительные на антитела к другим паразитам, включая образцы от пациентов с другими паразитарными инфекциями (Echinococcus, Filaria, Ascaris, Toxocara, Trichinella, Fasciola, Schistosoma, Trichuris, Amoeba, Leishmania, Plasmodium, мультиинфекция; n=25), онкологических больных (n=5) и здоровых доноров крови (n=9). Пограничные результаты считались положительными.
Результаты: Результаты, полученные с помощью Anti-Strongyloides ELISA, согласуются с референтным тестированием в 94,6% (53/56) всех образцов. В панели чувствительности Anti-Strongyloides ELISA результаты каждого метода сравнивались с результатами паразитологических методов, а степень согласия определялась коэффициентом Каппа (k). Статистическая значимость была установлена на уровне p < 0,05. был положительным в 16/17 сыворотках, как и чувствительность 94,1%. Сыворотка, дающая противоречивые результаты, диагноз стронгилоидоза зависит от идентификации личинок в образцах фекалий с помощью методов концентрирования или культур, была взята у пациента с множественными инфекциями. Среди контрольных образцов позитивность была обнаружена в 2/39 случаях (один больной раком и один донор крови), что привело к специфичности 94,9%.