Журнал клинической и клеточной иммунологии
Открытый доступ

Абстрактный

Две семьи CGD с гипоморфной мутацией в домене активации p67phox

Дирк Роос, Яап Д ван Бюл, Антон Т.Дж. Тул, Хуан Д. Матуте, Кристоф М. Маршал, Бу'Хусейн Хэйи, М. Явуз Кёкер, Мартин де Бур, Карин ван Леувен, Энтони В. Сигал, Эдгар Пик и Мэри С. Динауэр

Предыстория исследования: Хроническая гранулематозная болезнь (ХГБ) — редкий иммунодефицит, вызванный дефектом лейкоцитарной НАДФН-оксидазы. Этот фермент вырабатывает супероксид, необходимый для уничтожения бактерий и грибков фагоцитарными лейкоцитами. Большинство пациентов с ХГБ имеют мутации в CYBB, Х-сцепленном гене, кодирующем gp91 ^phox , каталитическую субъединицу лейкоцитарной НАДФН-оксидазы. Мы сообщаем здесь о трех пациентах с аутосомно-рецессивной ХГБ из двух семей с гомозиготной мутацией в NCF2 , гене, кодирующем p67 ^phox , активаторной субъединице НАДФН-оксидазы.

Методы: Активность лейкоцитарной НАДФН-оксидазы, экспрессия компонентов оксидазы и последовательности генов измерялись стандартными методами. Мутация, обнаруженная в гене NCF2 пациентов , была выражена как Ala202Valp67 ^phox в клетках K562 для измерения ее влияния на активность НАДФН-оксидазы. Транслокация мутировавшего p67 ^phox из цитозоля нейтрофилов пациентов в плазматическую мембрану измерялась с помощью конфокальной микроскопии и вестерн-блоттинга после очистки мембраны.

Результаты: Исключительной особенностью пациентов с ХГБ A67, о которых здесь сообщалось, является то, что мутация p.Ala202Val в домене активации p67 ^phox была явно гипоморфной: была отмечена существенная экспрессия белка p67 ^phox , а активность НАДФН-оксидазы в нейтрофилах пациентов составляла 20-70% от нормы, в зависимости от стимула, используемого для активации клеток. Степень транслокации Ala202Val-p67 ^phox в плазматическую мембрану во время активации клеток также зависела от стимула. Ala202Val-p67 ^{phox в клетках K562 опосредовал лишь около 3% нормальной оксидазной активности по сравнению с клетками, трансфицированными p67 phox} дикого типа .

Заключение: Мутация, обнаруженная в NCF2, является причиной снижения активности НАДФН-оксидазы и (легких) клинических проблем у пациентов. Мы предполагаем, что мутация p.Ala202Val изменила конформацию домена активации p67 ^phox , что привело к снижению активации gp91 ^phox .