Журнал клинической и экспериментальной офтальмологии
Открытый доступ

Абстрактный

Двумерный дифференциальный электрофорез в геле (2D-DIGE) выявляет белки, связанные с перекрестно-сшитыми актиновыми сетями в клетках трабекулярной сети человека

Жаклин И. Бермудес, Ханна К. Веббер, Гауранг К. Патель, Лян-Цзюнь Янь, Эббот Ф. Кларк и Вэймин Мао

Предыстория: Основным фактором риска первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ) является повышенное внутриглазное давление (ВГД). У пациентов с ПОУГ сопротивление оттоку через трабекулярную сеть (ТС) аномально повышено. Одним из важных патологических изменений в ТС, связанных с глаукомой, является образование избыточных перекрестно-связанных актиновых сетей (CLAN). CLAN представляют собой паутинные полигональные структуры, обнаруженные в клетках и тканях ТС при сливающейся глаукоме. Факторы, связанные с глаукомой, преобразующие формирующий фактор роста бета 2 (TGFβ2) и глюкокортикоиды вызывают образование CLAN в неглаукомных клетках ТС (НТС). CLAN могут повышать жесткость клеток и изменять гомеостаз, тем самым способствуя повышению ВГД.

Методы: Мы использовали протеомный подход для идентификации CLAN-ассоциированных белков. Мы обработали конфлюэнтные первичные клетки NTM 0,1% этанолом (EtOH; растворитель), 100 нМ дексаметазоном (DEX) или 5 нг/мл TGFβ2 плюс 0,1% EtOH в течение 7 дней для индукции CLAN. Нерастворимая фракция Triton, содержащая цитоскелет, была извлечена для двумерного дифференциального электрофореза в геле (2D-DIGE). Масс-спектрометрия (MS) использовалась для идентификации дифференциально экспрессируемых белков в 2D-гелях. Колокализация идентифицированных белков с CLAN была подтверждена с помощью иммуноцитофлуоресцентной (ICF) микроскопии.

Результаты: 2D-DIGE выявил 103 дифференциально экспрессируемых белка в обеих группах лечения. MS идентифицировал 23 наиболее обогащенных белка. ICF показал, что кальдесмон, кальпонин, легкая цепь миозина и тропомиозин были колокализованы с CLAN.

Выводы: Мы идентифицировали подмножество белков, дифференциально экспрессируемых в клетках NTM с образованием CLAN, вызванным DEX или TGFβ2. Потенциальное участие этих белков в образовании и/или поддержании CLAN требует дальнейшего изучения. Эти белки могут дать новое понимание патогенеза глаукомы.