Журнал лейкемии
Открытый доступ

Абстрактный

Использование глубокого секвенирования нового поколения для анализа мутации домена киназы BCR-ABL1 у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом, устойчивым к иматинибу, во Вьетнаме

Дуонг CQ, Нгуен C, Нгуен TT, Нгуен LV, Pham HQ, Trinh HTT, Tran HC, Le TQ, Pham HT, Hong TH, Nguyen TH, Truong HN, Bach KQ и Нгуен TA

Предыстория: Хронический миелоидный лейкоз — клональное миелопролиферативное новообразование, характеризующееся наличием хромосомной транслокации t(9; 22)(q34; q11). Это обнаруживается в более чем 95% случаев и приводит к образованию белка слияния BCR-ABL1 с высокой активностью тирозинкиназы. В течение последних десятилетий иматиниб и другие поколения ингибиторов тирозинкиназы эффективно использовались для таргетной терапии заболевания. Однако в последнее время было зарегистрировано много случаев лекарственной устойчивости из-за мутации в домене киназы гена слияния BCR-ABL1. Чтобы предоставить дополнительную информацию об этой заболеваемости, мы провели ретроспективное исследование 141 пациента с хроническим миелоидным лейкозом, резистентным к иматинибу, для анализа мутации домена киназы методом глубокого секвенирования. Другая группа из 20 нелеченных пациентов была добавлена ​​в качестве контроля. Методы: РНК из клеток костного мозга была извлечена с последующим синтезом кДНК. Для амплификации домена киназы гена слияния BCR-ABL1 была проведена вложенная полимеразная цепная реакция. Амплифицированные продукты контролировались по размеру, концентрации и готовили библиотеку секвенирования ДНК. Анализ последовательности проводился с использованием секвенатора Illumina MiSeq и программного обеспечения Sequence Pilot. Результаты секвенирования были случайным образом выбраны для секвенирования по Сэнгеру. Результаты: Ни один из контрольной группы не был положительным по мутации домена киназы. Было 47 из 141 пациента (33%), обнаруженных по крайней мере с одной заменой нуклеотидов. Результаты секвенирования также были подтверждены секвенированием по Сэнгеру. Из этих 47 образцов было идентифицировано 72 замены нуклеотидов 28 типов, изменено 24 кодона. Среди них наиболее частыми мутациями были Y253F/H, M351T, G250E, F359V/I и M244V, в то время как T315I заняла всего 4,1%. Также было несколько образцов, содержащих множественные замены и новые вариации. Заключение: Глубокое секвенирование следующего поколения является чувствительным и эффективным методом обнаружения мутации домена киназы, и наши результаты могут предоставить дополнительную информацию о мутации лекарственной устойчивости при хроническом миелоидном лейкозе.