Ферментная инженерия
Открытый доступ

Абстрактный

Оценка и характеристика продукции протеазы Bacillus Sp., индуцированной УФ-мутагенезом

Неха Карн и Сантош Кумар Карн

 Фенотипические мутанты Bacillus sp. были разработаны с помощью УФ-облучения для проверки их способности усиливать активность протеазы. Среди пяти мутантов RS1 оказался более эффективным по сравнению с другими мутантами и штаммом дикого типа. Максимальное количество протеазы было получено из клеточного экстракта штамма Bacillus sp. RS1, который использовался для очистки и характеристики. Фильтрат культуры Bacillus sp. RS1 был очищен осаждением сульфатом аммония; отфильтрованный супернатант культуры показал самую высокую удельную активность протеазы и содержал 86% от общего процента протеазы культуры. Осаждение сульфатом аммония между 40 и 70% использовалось для очистки протеазы и привело к 20-кратному увеличению удельной активности по сравнению с неконцентрированным супернатантом. Очистка на колонке привела к 44-кратному увеличению удельной активности по сравнению с неконцентрированным супернатантом Bacillus sp. RS1. На основании полученных результатов мутантный штамм RS1 был признан наиболее подходящим для очистки фермента протеазы. Очищенный фермент протеазы имел максимальную активность при pH 7,0 с фосфатным буфером, а оптимальное время инкубации составило 24 часа. Протеаза, выделенная из RS1, стабильна при pH 8,5 и температуре 60°C, в дальнейшем этот фермент может быть использован в коммерческих целях.