Журнал клинической и экспериментальной офтальмологии
Открытый доступ

Абстрактный

Метод двойного окрашивания для различения сосудов сетчатки в модели кислородно-индуцированной ретинопатии (OIR)

Лин Сюй, Пин Ху, Е Чжан, Цзиньи Лун, Сюэ Ву, Юхун Е, Нин Цуй, Фэй Сунь, Синьминь Лу, Цзикуй Шен, Да Лун

Цель: Целью данного исследования было усовершенствование экономящего время, средства и трудозатраты метода различения структурных сосудов сетчатки, зон неоваскуляризации (NV) и неперфузионных (NP) зон у мышей с ретинопатией, вызванной кислородом (OIR).

Методы: Мыши C57BL/6J подвергались воздействию гипероксических условий (75% ± 2% O ₂ ) с 7-го дня после рождения (P7) по P12, а затем возвращались на комнатный воздух, чтобы вызвать максимальную ретинальную неоваскуляризацию (NV). После того, как сетчатки были изолированы на P17, ретинальные целые препараты последовательно окрашивались лектином Griffonia Simplicifolia (GSL) IB4-594 и GSL IB4-FITC с использованием методов окрашивания с контролем времени и концентрации. Этот улучшенный метод использовал только две среды окрашивания, и никаких других блокирующих сред не требовалось. Изображения были получены с помощью флуоресцентной микроскопии и объединены с помощью Adobe Photoshop. Площадь ретинальной неоваскуляризации и неперфузируемая область измерялись с помощью Image-Pro Plus.

Результаты: Окрашивание концентрацией GSL IB4-594 в пропорции 1:100 в течение 45 минут могло почти полностью окрасить все неоваскулярные пучки, что могло оценить надежный и последовательный статус ретинальной неоваскуляризации. Между тем, ретинальные препараты OIR были окрашены концентрацией GSL IB4-FITC в пропорции 1:100 в течение ночи с последующим окрашиванием GSL IB4-594, что позволило легко идентифицировать и количественно оценить области сетчатки без перфузии, структурные сосуды и неоваскулярные пучки у мышей OIR.

Заключение: Использование воспроизводимого и количественно определяемого двойного окрашивания сетчатки для оценки NV и NP в модели OIR демонстрирует важность соответствующего метода окрашивания, который может легко рассчитать соотношение NV и NP. Другие результаты, такие как оценка эффективности антиангиогенеза биспецифических пептидов для антиангиогенеза, полученные с использованием этого метода, предполагают повышенную клиническую и научную исследовательскую ценность того, что соотношение NV и NP можно легко определить с помощью двойного окрашивания сетчатки.