Ферментная инженерия
Открытый доступ

Абстрактный

Человеческий пептид защищает от лейкемии, вызванной терапией

Р. Виехе

Лечение рака доксорубицином и этопозидом увеличивает риск перестроек в гене смешанной лейкемии или миелоидно-лимфоидной лейкемии (MLL) [1-3], охватывающем область кластера точек разрыва размером 7,3 кб (MLLbcr) на хромосоме 11 с связанной с терапией горячей точкой размером 0,4 кб [2]. Было показано, что митохондриальный фермент эндонуклеаза G (EndoG) накапливается в ядре после генотоксического лечения, вызывающего репликационный стресс, где он расщепляет MLLbcr [4]. Была разработана репортерная плазмида на основе GFP, имитирующая перестройки MLLbcr [5], и использовалась для скрининга фракционированной лиофилизированной библиотеки пептидов гемофильтрата от пациентов с хронической почечной недостаточностью с целью идентификации человеческого пептида, предотвращающего перестройки MLLbcr. Таким образом, клетки были предварительно обработаны пептидами с последующим воздействием этопозида или доксорубицина и FACS-анализом для обнаружения восстановления GFP. После двух раундов хроматографического фракционирования и масс-спектрометрического анализа мы идентифицировали пептид, который смягчает перестройки MLLbcr в различных типах клеток, не влияя на клеточный цикл или гибель клеток (изображение). Иммунофлуоресцентная микроскопия и иммунопреципитация хроматина показали, что пептид ингибирует накопление ядерного EndoG и связывание MLLbcr, тогда как общее повреждение ДНК не было затронуто пептидом. В совокупности мы описываем человеческий пептид, предотвращающий перестройки MLLbcr путем вмешательства в функции ядерного EndoG.