Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Приготовление конъюгата антител к IgG человека с пероксидазой хрена и его использование в экспериментах по ИФА и вестерн-блоттингу

Рамеш Кумар К., Снеха Ксиавур, Сварна Латха, Виджай Кумар и Сукумаран

Исследования нашего эксперимента связаны со связыванием ферментов с антителами. Это включает в себя образование стабильной ковалентной связи между ферментом и антителом. Мы использовали различные ферменты для этого исследования, которые изменяются в связывающем действии. Ферменты, которые мы использовали, например, пероксидазу хрена (HRPO), уреазу или щелочную фосфатазу. Исследования фермента и антигенспецифического моноклонального или поликлонального антитела, в котором ни антигенсвязывающий сайт, ни активный сайт фермента функционально не изменены. Фермент, наиболее часто используемый в приготовлении иммунореагента (конъюгата антитело-фермент), - это пероксиды хрена. Этот фермент дешев и может быть присоединен к иммунореагенту различными способами. Более того, для него также доступно множество хромогенных субстратов. Наши экспериментальные исследования по конъюгации пероксидазы хрена (HRPO) с антителом (античеловеческим IgG) будут проводиться методом окисления периодатом. Мы приготовили конъюгат античеловеческого IgG-HRP в нашей лаборатории. Это будет использоваться для экспериментов ELISA и вестерн-блоттинга, а очищенный из различных образцов сыворотки человека IgG будет использоваться в качестве антигена в вышеуказанных экспериментах. Этот эксперимент проводится в два различных этапа, указанных как: Приготовление конъюгата античеловеческого IgG-пероксидазы хрена, Характеристика изолированного человеческого IgG.