Ферментная инженерия
Открытый доступ

Абстрактный

Обнаружение мутаций генов с помощью фермента: чипы для простого и очень деликатного метода расщепления несоответствий ферментов

Воскаридис К

Обеспечение неизвестных разновидностей ДНК является одним из важных вопросов во многих областях атомной науки. Секвенирование по Сэнгеру было использовано в повседневной практике по этой причине. Однако, когда вам нужно просмотреть большую предполагаемую ДНК или многочисленные примеры, эта стратегия является сложной, дорогостоящей и утомительной. В последнее время будущее секвенирование (NGS) использовалось в различных мотивах, стоящих за скринингом изменений. Эта огромная инновация секвенирования подходит для скрининга размера генома, а также для скрининга списка качеств, которые вызывают сравнительные агрегаты, например, развитие диабета у молодых (MODY). Если достаточно примеров собрано без промедления, NGS является веселой и более того, увлекательной системой, поскольку объединение тестов снижает эксплуатационные расходы на каждый тест. Однако, если вам нужно проверить 10~50 кб ДНК-группировки за один эксперимент, вам нужна продуктивная и полезная стратегия скрининга. Как правило, полиморфизм одноцепочечной адаптации (SSCP), а также гетеродуплексное исследование (HA) были наиболее часто используемыми методами по этой причине. Однако, эффективность этих методов была неприемлема для тщательного исследования. Хотя было представлено значительное количество измененных стратегий скрининга трансформации на основе ПЦР, ни одна из них не стала широко известной из-за низкой эффективности или потенциальной нагрузки. Две измененные стратегии для HA, денатурирующий угловой гель-электрофорез (DGGE) и температурный угловой гель-электрофорез (TGGE), были созданы для улучшения задержки перемещения гетеродуплексной ДНК в геле путем изменения части геля или температуры. Хотя эти стратегии, возможно, имеют предпочтительное положение по сравнению с HA, они требуют исключительного оборудования для запуска или создания геля. Таким образом, эти измененные методы не стали такими популярными, как первый HA. Денатурирующая элитная жидкостная хроматография (DHPLC) является своего рода исследованием перемещения переносимости, которое не включает электрофорез, а скорее различает изменения в зависимости от уменьшенного периода обслуживания гетеродуплекса в секции HPLC. Хотя эта новая инновация обеспечивает высокую аффективность, для достижения наибольшей аффективности необходимо утомительное улучшение условий распознавания изменений для каждой группы ДНК. Идеальный метод скрининга трансформации потребовал бы традиционного оборудования и реагентов; к любым группам ДНК и типам изменений можно применить единое соглашение; и он обеспечит высокую аффективность, высокую пропускную способность и значительное выполнение затрат. Расщепление составной ошибки (EMC) возможно удовлетворяет этим стандартам.