ISSN: 2456-3102
Vadim Timerbaev, Sergey Dolgov and Tatyana Mitiouchkina
Несмотря на расширение количества наследственно созданных типов растений и их очевидную денежную практичность, такие урожаи осознанно признаются обществом, в основном из-за близости внешнего наследственного материала от далеких форм жизни (микроскопических организмов, инфекций и т. д.) для декларации целевых качеств в трансгенных растениях и как особые маркеры защиты от антитоксинов и гербицидов. В этих условиях особое отчаяние уделяется процедурам, с помощью которых новые глубоко полезные типы урожаев могут быть получены без внешнего наследственного материала, в основном бактериальной исходной точки, и без качеств противодействия инфекции, отсутствие которых, скорее всего, будет способствовать выбросу наследственно настроенных форм жизни в открытые рамки, особенно в местах с сомнением, идентифицированных с ГМО, например, в Европейском Союзе.
Поскольку методы получения безмаркерных живых существ приобрели исключительное значение только в последнее десятилетие, подавляющее большинство исследований посвящено совершенствованию новых инноваций и векторных структур. В этой работе для удаления надоедливой ДНК мы использовали сайт-явную рекомбиназу, имеющую место в векторах pMF (Plant Research International, Вагенинген, Нидерланды) (Schaart et al., 2004). Основным предпочтительным положением этой структуры является ее последовательный двойной выбор. Первичным этапом после вмешавшегося Agrobacterium изменения является определение регенерантов с использованием антимикробных препаратов, например, канамицина, гигромицина или фосфинотрицина, а дальнейшее удаление групп ДНК, фланкированных безупречными рекомбинационными направлениями (RS), происходит из-за инициации смеси рекомбиназы R, которая инактивируется в поле зрения лиганд-ограничивающей области (LBD) глюкокортикоидного рецептора. Его активация завершается после инкубации растительной ткани в ответ на дексаметазон (Dex). Дальнейший выбор на среде с 5-фторцитозином (5-FC) предотвращает улучшение растительных тканей, содержащих качество codA (цитозиндезаминаза меняется с нетоксичного 5-FC на цитотоксичный 5-фторурацил).
Близость маркерных качеств, особенно антимикробной резистентности, в наследственно измененных растениях вызывает беспокойство в глазах общественности из-за опасений, связанных с опасностями для земли и благополучия человека. Формирование трансгенных растений, которые не содержат внешнего наследственного материала, особенно бактериального и вирусного корня, в значительной степени облегчает штамм. Здесь мы использовали структуру pMF, содержащую рекомбиназу R Z. rouxii и бифункциональное селективное качество CodA-nptII для получения трансгенных растений томатов и яблок без маркера, передающих очень сладкое качество тауматина II из тропического растения Thaumatococcus daniellii, выровненное с явным рекламодателем натурального продукта качества E8 и элиминатором rbsS3A. Мы использовали два различных набора рекомбиназы.
Ранний выбор основных каллюсов и отложенная обработка дексаметазоном листьев или черешков трансгенных растений с последующим выбором на среде 5-FC. В качестве элективных мы изменили растения вектором, передающим только ленту сочленения тауматина без специфических маркеров. Трансгены для этой ситуации были выбраны путем ПЦР-исследования всех полученных регенерантов. Мы приобрели 170 трансгенных линий томата, которые были полностью рассечены с помощью ПЦР. После принятия движения рекомбиназы была получена только одна полностью бесмаркерная трансгенная линия томата. Сравнительные результаты были получены путем раннего определения. Прямое изменение лентой тауматинаII также привело к двум растениям без маркеров. Мы рекомендуем фрагментарное извлечение и хромосомные ревизии из-за близости различных и нетипичных или неполных включений Т-ДНК, происходящих в различных случаях простых измененных растений томата.
Мы также получили три свободные трансгенные линии яблок, которые были полностью рассечены с помощью ПЦР на предмет близости последовательностей Т-ДНК. В тот момент мы использовали отложенную методологию для выбора растений без маркеров, при этом одна проверенная линия содержала все части ленты сочленения. После принятия движения рекомбиназы мы получили более 30 сублиний, большая часть из которых потеряла защиту от канамицина. ПЦР и исследование мазков по Саузерну показали, что каждое неудачное качество и договоренности между назначениями RS были эвакуированы процессом рекомбинации, в то время как качество энтузиазма с административными компонентами доступно в полностью приобретенных растениях. В любом случае, с помощью исследования полуколичественной ПЦР мы можем различить сочленение качества тауматина в большинстве, но не все пришли к сублиниям. Ранняя система определения, как немедленное изменение, была неэффективна для создания растений яблок без маркеров. Структура pMF разумна для создания яблок без маркеров или других упрямых урожаев, поскольку цисгенные растения томата могут быть получены путем прямого изменения качеством интриги. Проведение экспертизы в некоторой степени финансировалось за счет гранта Российского научного фонда на проведение геологоразведочных работ № 14-50-00079.