Журнал клинической и клеточной иммунологии
Открытый доступ

Абстрактный

Значимость нитроксидации альбумина при ревматоидном артрите: биохимическое и клиническое исследование

Зарина Ариф, Мир Ясир Арфат, Джамал Ахмад, Асиф Заман, Ширин Нааз Ислам и М. Асад Хан

Цель: Изучить роль пероксинитрит-модифицированного человеческого сывороточного альбумина (нитроксидированного альбумина) при ревматоидном артрите. Методы: Человеческий сывороточный альбумин подвергался воздействию пероксинитрита, и изменения в структуре альбумина отслеживались с помощью УФ-видимой, флуоресцентной и круговой дихроичной спектроскопии, тиофлавина Т, связывания с конго красным и инфракрасной спектроскопии с ослабленным полным внутренним отражением и преобразованием Фурье (ATR-FTIR). Антиоксидантные свойства нитроксидированного альбумина оценивались с помощью теста на гемолиз эритроцитов, вызванный свободными радикалами. Маркеры окисления белков, такие как карбонил, тиол, дитирозин и гемолиз эритроцитов, оценивались в сыворотке пациентов с РА. Связывание аутоантител в сыворотке больных РА (n=50) с нитроксидированным альбумином изучалось с помощью прямого связывания, ингибирующего ИФА и анализа сдвига электрофоретической подвижности в геле. Результаты: Нитроксидированный альбумин показал образование нитротирозина, нитротриптофана, карбонила, дитирозина и снижение флуоресценции тирозина и триптофана и α-спиральности. Интенсивность флуоресцентного излучения тиофлавина Т и конго красного увеличилась при связывании с нитроксидированным альбумином. Кроме того, вторичная и третичная структуры нитроксидированного альбумина были изменены, что было очевидно с помощью ATR-FTIR, дальнего и ближнего УФ-КД. Аутоантитела в сыворотках РА (или очищенный из сывороток IgG) показали повышенное связывание с нитроксидированным альбумином, что было определено прямым связыванием и ингибированием ELISA. Карбонилы белков, дитирозин и гемолиз эритроцитов были значительно выше, но тиол был значительно ниже в сыворотках РА по сравнению с контрольной группой, соответствующей возрасту и полу. Заключение: Эндогенно доступный пероксинитрит может нитрировать и окислять альбумин, что приводит к нитрации/окислению белка и последующему образованию сшивок, агрегатов и иммуногенного нитроксидированного альбумина. Таким образом, нитроксидированный альбумин может быть потенциальным триггером для аутоантител у пациентов с РА.