Ферментная инженерия
Открытый доступ

Абстрактный

Повторное использование циклодекстрингликозилтрансферазы путем иммобилизации на магнитных носителях

Кейт Кристина Бланко, Франсиско Хосе дос Сантос, Наталия Соцца Бернарди, Мигель Хафеличчи Жуниор, Рубенс Монти и Йонас Контьеро

ЦГТаза из Bacillus lehensis, выделенная из сточных вод маниоковой мукомольной фабрики в штате Сан-Паулу, Бразилия, была иммобилизована после частичной очистки с использованием осаждения сульфатом аммония. Частично очищенная ЦГТаза была иммобилизована путем ковалентного связывания на носителе из магнетита, который был силанизирован 3-аминопропилтриметоксисиланом и активирован глутаральдегидом, что дало выход 16,27% и конечную активность 17,54% от исходной активности. Были определены физико-химические свойства и кинетика циклодекстрингликозилтрансферазы из Bacillus lehensis. Оптимальная температура иммобилизованной ЦГТазы была выше, чем у растворимого фермента (70°C и 55°C соответственно). Оптимальный pH иммобилизованного фермента был таким же, как у растворимого фермента (pH 8,0). В анализах pH и термостабильности 50% активности фермента сохранялось через 24 ч, а 26,22% исходной активности сохранялось через 160 мин соответственно. Константа Михаэлиса-Ментен составляла 0,82 мг.мл-1, а максимальная скорость составляла 45,45 моль.мл-1.мин-1. В исследовании повторного использования иммобилизованного фермента после четырех циклов сохранялось 16,66% исходной каталитической активности, что демонстрирует возможность восстановления и повторного использования фермента, иммобилизованного на магнетите.