Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ

Абстрактный

Метод ВЭЖХ для количественного определения галофугинона в мочеточнике человека: применение ex-vivo

Сасси А., Хассаири А., Калель М., Джайдан М. и Саад САГУЕМ.

Разработан новый метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для изучения диффузии галофугинона в стенке мочеточника. Экстракты мочеточника человека были приготовлены путем трипсинового переваривания тканей с последующей экстракцией жидкость-жидкость с использованием изопропанола после осаждения белков. Метод использовал обращенно-фазовую колонку C18 с подвижной фазой, подаваемой в аналитическую колонку в соответствии с программой градиента, начиная с состава ацетат аммония (pH 4,7; 10 мМ)-ацетонитрил-триэтиламин (70:30:0,2, об./об./об.) и линейными изменениями до 90% ацетонитрила за 11 мин. Экстракция жидкость-жидкость оказалась селективной для HFG и обеспечила высокую степень извлечения 97,7%. Метод ВЭЖХ был успешно валидирован с применением нового протокола валидации с использованием профиля точности, основанного на новой концепции, концепции общей погрешности. Протокол V4 с пятью уровнями концентрации и 105 испытаниями был выбран в соответствии с алгоритмом, разработанным комитетом SFSTP 2003. Пределы приемлемости были установлены на уровне ± 20%, в то время как риск был установлен на уровне 5%. Метод был признан точным в диапазоне концентраций 0,2–10 мкг/мл. Предел обнаружения для HFG составил 0,06061 мкг/мл. Чтобы продемонстрировать применимость этого метода в применении ex vivo, количественное определение HFG в стенке было применено для изучения его распределения из геля (0,03% w/w HFG) в мочеточнике человека.