Журнал прикладной фармации
Открытый доступ
ISSN: 1920-4159
ISSN: 1920-4159
Моханнад Идресс, Мохаммед Салим, Асия Эль-Хасан
Целью данного исследования является изучение потенциала разработки L-глутаминазы природного происхождения, выделенной из зеленого перца чили, в качестве противолейкозного препарата, который избирательно воздействует на метаболизм раковых клеток в отличие от других неселективных химиотерапевтических средств. Это было сделано путем определения ее удельной активности и оптимальных условий для активности L-глутаминазы с последующей частичной очисткой и анализом цитотоксичности in vitro. Активность L-глутаминазы измерялась в водном экстракте плодов методом Несслеризации после гомогенизации в жидком азоте и экстракции 0,05 М буфером бората натрия (pH 8,5). Результаты показали, что активность L-глутаминазы на миллиграмм общего белка составила 18,7 ед./мг. Были изучены оптимальные условия для каталитической активности сырой L-глутаминазы, выделенной из плодов чили. Результаты показали, что максимальная активность L-глутаминазы была достигнута, когда фермент инкубировали с 250 мМ L-глутамина при 37°C в течение 30 минут в присутствии фосфатного буферного раствора при pH 7,2. Максимальная скорость (Vmax) и константа сродства (Km) L-гутаминазы составили 14,1 мМ и 90,2 мМ соответственно. Неочищенную L-глутаминазу очищали высаливанием с использованием семи различных концентраций сульфата аммония в диапазоне от 20% до 80% насыщения. Удельная активность очищенной L-глутаминазы увеличивалась с 18,7 до 98,5 ед./мг при высаливании в 50% растворе сульфата аммония. Этот результат свидетельствует о высокой эффективности осаждения сульфатом аммония как метода очистки. Оценка противолейкозных свойств проводилась путем сравнения цитотоксичности L-глутаминазы с доксорубицином и их комбинации против клеточной линии THP-1 с помощью анализа МТТ. Результаты показали значительную противораковую активность с процентом ингибирования 72,75 % в случае комбинации фермента с доксорубицином по сравнению с одним ферментом (60,28 %). Эти результаты позволяют сделать вывод о том, что L-глутаминаза зеленого перца чили может быть разработана как противолейкозное средство благодаря ее высокому содержанию в перце чили, простоте очистки и значительной цитотоксичности против клеток моноцитарной лейкемии человека.